Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 23 стр.

    3. 5%-ный раствор метафосфорной кислоты.
    4. 0.001 н. раствор иодата калия - KJO3 (навеску 0,3568 г иодата, высу-
шенного в течение двух часов при 102оС растворяют в воде в мерной кол-
бе объемом 1 дм3; в другую колбу на 1 дм3 берут 100 см3 и доводят водой
до мерной черты.
    5. 0,001 н. раствор 2, 6-дихлорфенолиндофенола - краска Тильманса
(отвешивают на небольшом часовом стекле 60 мг сухой краски, переносят
в мерную колбу на 200 см3, прибавляют 100 см3 дистиллированной воды и
4-5 капель 0,01 н. щелочи; взбалтывают в течение 10 минут, доводят дис-
тиллированной водой до метки и фильтруют в сухую колбу).
    6. 1%-ный раствор крахмала.
    7. Микробюретка с градуировкой 0,01 см3, емкостью 5 см3.
    8. Центрифуга.
                                Ход анализа
    Навеску листьев 1-2 г (в зависимости от активности фермента) поме-
щают в фарфоровую ступку и тщательно измельчают в присутствии бу-
ферной смеси Мак-Ильвейна, рН 6. Растертую массу переносят в мерную
колбу на 25 или 50 см3, доводят буфером до метки и перемешивают. В ко-
ническую колбочку на 50 см3 вносят 2 см3 полученной вытяжки (гомогена-
та, центрифугата или фильтрата), содержащей фермент, и приливают 2 см3
раствора аскорбиновой кислоты. Колбы с содержимым выдерживают при
                        o
температуре 25 или 30 С в течение часа. По окончании времени экспози-
ции реакцию прекращают, добавляя 2 см3 5%-ного раствора метафосфор-
ной кислоты. Одновременно готовят контрольные пробы. Для этого в ко-
нические колбы вносят 2 см3 суспензии, 2 см3 5%-ной метафосфорной ки-
слоты и в последнюю очередь - 2 см3 аскорбиновой кислоты. Остаток
неокисленной аскорбиновой кислоты титруют 0,001 н. раствором иодата
(1 см3 0,001 н. KJO3 равен 0,088 мг аскорбиновой кислоты). В последнем
случае титрование ведут до появления синей окраски в присутствии кри-
сталлика (5-10 мг) KJ и нескольких капелек крахмала. Активность фермен-
та (Х), выраженную в миллиграммах окисленной аскорбиновой кислоты на
1 г сырой ткани, вычисляют по формуле:
                                  (a − в ) ⋅ T ⋅ v1
                              X=                    ,
                                      v2 ⋅ н
где а - количество см3 0,001 н. раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола (или
иодата), израсходованного на титрование контрольной пробы;
    в - число см3 0,001 н. раствора 2, 6-дихлор- фенолиндофенола (или ио-
дата), израсходованного на титрование опытной пробы;
    Т - титр краски (или иодата);

22