Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 24 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

БФУ им. Канта | Калининград

Составители: 

Рубрика: 

23
v
1
- общий объем вытяжки;
v
2
- объем вытяжки, взятой для титрования;
н - навеска вещества (в г ).
Для пересчета на 100 мг белка производят определение белкового азота
в листьях.
Литература
1. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Смирнова-Иконникова М.И., Ярош Н.П.,
Луковникова Г.А. Методы биохимического исследования растений. Л.: Изд-во
Колос, 1972. С. 49-50.
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
АКТИВНОСТИ АСКОРБИНАТОКСИДАЗЫ
В методе спектрофотометрического определения активности аскорби-
натоксидазы использовано свойство аскорбиновой кислоты поглощать
свет с максимумом при длине волны 265 нм. Об активности фермента су-
дят по уменьшению величины оптической плотности, учитывая, что сте-
пень окисления аскорбиновой кислоты пропорциональна количеству фер-
мента [1].
Реактивы
1. Фосфатный буфер с рН 7,3-7,4.
2.
5
.
10
-3
М раствор .
3.
5
.
10
-3
М раствор MgSО
4
.
4. 5
.
10
-5
М раствор аскорбиновой кислоты.
Ход анализа
Навеску листьев 1г ±0,001г тщательно растирают в фарфоровой ступке
и переносят в мерную колбу на 50 см
3
с помощью охлаждённого фосфат-
ного буфера. Экстракт центрифугируют при 4000 об/мин или фильтруют
на холоде в течение короткого времени. В опытную кювету вносят 0,1 см
3
раствора MgSО
4
, 2 см
3
фосфатного буфера, 0,1см
3
ферментной вытяжки
(центрифугата или фильтрата) и 0,7 см
3
аскорбиновой кислоты. Устанав-
ливают нулевое положение на приборе по кювете, в которую вносят те же
компоненты, что и в опыте, только вместо аскорбиновой кислоты прили-
вают 0,7 см
3
Н
2
О. С началом измерения опытного образца включают се-
кундомер. Первое измерение проводят через 30 с, а затем повторно каж-
дую минуту в течение 5-6 минут или другого интервала времени в зависи-
мости от активности фермента.
При длительной экспозиции делают контроль на самоокисление аскор-
биновой кислоты. Для этого в кювету спектрофотометра вносят 2,3 см
3
фосфатного буфера и 0,7 см
3
аскорбиновой кислоты, определяют оптиче-
    v1 - общий объем вытяжки;
    v2 - объем вытяжки, взятой для титрования;
    н - навеска вещества (в г ).
    Для пересчета на 100 мг белка производят определение белкового азота
в листьях.
                                 Литература
   1. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Смирнова-Иконникова М.И., Ярош Н.П.,
Луковникова Г.А. Методы биохимического исследования растений. Л.: Изд-во
Колос, 1972. С. 49-50.

           СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
             АКТИВНОСТИ АСКОРБИНАТОКСИДАЗЫ
   В методе спектрофотометрического определения активности аскорби-
натоксидазы использовано свойство аскорбиновой кислоты поглощать
свет с максимумом при длине волны 265 нм. Об активности фермента су-
дят по уменьшению величины оптической плотности, учитывая, что сте-
пень окисления аскорбиновой кислоты пропорциональна количеству фер-
мента [1].
                                Реактивы
   1. Фосфатный буфер с рН 7,3-7,4.
   2. 5.10-3 М раствор .
   3. 5.10-3 М раствор MgSО4.
   4. 5.10-5 М раствор аскорбиновой кислоты.
                               Ход анализа
   Навеску листьев 1г ±0,001г тщательно растирают в фарфоровой ступке
и переносят в мерную колбу на 50 см3 с помощью охлаждённого фосфат-
ного буфера. Экстракт центрифугируют при 4000 об/мин или фильтруют
на холоде в течение короткого времени. В опытную кювету вносят 0,1 см3
раствора MgSО4, 2 см3 фосфатного буфера, 0,1см3 ферментной вытяжки
(центрифугата или фильтрата) и 0,7 см3 аскорбиновой кислоты. Устанав-
ливают нулевое положение на приборе по кювете, в которую вносят те же
компоненты, что и в опыте, только вместо аскорбиновой кислоты прили-
вают 0,7 см3 Н2О. С началом измерения опытного образца включают се-
кундомер. Первое измерение проводят через 30 с, а затем повторно каж-
дую минуту в течение 5-6 минут или другого интервала времени в зависи-
мости от активности фермента.
   При длительной экспозиции делают контроль на самоокисление аскор-
биновой кислоты. Для этого в кювету спектрофотометра вносят 2,3 см3
фосфатного буфера и 0,7 см3 аскорбиновой кислоты, определяют оптиче-
                                                                       23

Страницы