Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 36 стр.

тканях положен спектрофотометрический метод анализа рибофлавина в
культуральной жидкости штаммов-продуцентов [1], а также флуореметри-
ческий метод определения рибофлавина в растениях [2].
    Для определения содержания рибофлавина навеску анализируемого
растительного материала (1г) растирают в фарфоровой ступке с добавле-
нием 15 мл 0,1 н. раствора HCl до гомогенного состояния.
    Растёртую массу количественно переносят в мерный цилиндр на 100 мл
и доводят объём смеси 0,1н раствором HCl до 75 мл. Затем содержимое
мерного цилиндра переносят в термоустойчивую колбу на 100 мл, которую
выдерживают на водяной бане в течение 45 минут при частом помешива-
нии.
    Термическая обработка в кислой среде разрушает пигменты и способ-
ствует освобождению рибофлавина. По окончании экспозиции содержимое
колбы охлаждают и отфильтровывают с помощью бумажного или стек-
лянного фильтра № 4.
    Оптическую плотность раствора определяют спектрофотометрически
при 445 нм по отношению к растворителю (01н раствор HCl). Содержание
рибофлавина рассчитывают по калибровочному графику. Таким образом
определяется окисленная форма рибофлавина.
    Для определения общего содержания рибофлавина проводят окисление
его восстановленной формы. Для этого в пробирку с притертой пробкой
приливают 5 мл фильтрата и нейтрализуют его 0,1 н. раствором NaOH
(pH=7). Затем добавляют 0,5 мл 0,05 н. щелочного раствора железосинеро-
дистого калия (16,5 г перекристаллизованного K3Fe(CN)6 + 70 г Na2CO3 в
литре воды; раствор хранить в тёмной склянке). Избыток щелочного рас-
твора красной кровяной соли удаляют, добавляя 1,5 мл 18%-ного раствора
глюкозы. Пробирку выдерживают на кипящей водяной бане в течение
30 минут, после чего содержимое охлаждают и определяют оптическую
плотность раствора при 445 нм.
    Рассчитывают суммарное содержание восстановленного и окисленного
рибофлавина по калибровочному графику. По разнице определяют вос-
становленный рибофлавин.
    Для построения калибровочного графика навеску чистого рибофлавина
(20 мг) растворяют в 500 мл дистиллированной воды. Из данного раствора
путём разбавления готовят серию стандартных растворов, содержащих от
1,2 мкг до 12 мкг рибофлавина в 1 мл. Оптическую плотность полученных
растворов определяют при 445нм и по результатам спектофотометрирова-
ния строят калибровочный график. Количественное содержаеие рибофла-
вина выражают в мкг/г растительной ткани.


                                                                     35