Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 37 стр.

                              Литература
   1. Полануер Б.М., Дедова О.А., Гаспаров В.С. Сравнение различных методов
количественного определения рибофлавина в культуральной жидкости штам-
мов-продуцентов // Биотехнология. 1995. №5-6. С. 44-47.
   2. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Смирнова-Иконникова М.М., Ярош Н.П.,
Луковникова Г.А. Методы биохимического исследования растений. Л.: Колос,
1972. С. 104-106.

           СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
                   НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ
   Растение является довольно трудным объектом для исследования нук-
леиновых кислот, тем не менее в настоящее время имеется немало методов
их количественного определения в различных тканях, которые позволяют
определять РНК и ДНК в одной навеске [1]. Определение фосфора РНК и
ДНК ведется на спектрофотометре при длине волн 270 и 290 нм в свежем
или фиксированном материале. Фиксацию материала можно проводить
лиофилизацией или горячим 96%-ным этанолом.
   Предварительное удаление пигментов, кислоторастворимого и липид-
ного фосфора является непременным условием спектрофотометрического
определения фосфора РНК и ДНК.
                              Ход работы
   Для определения содержания нуклеиновых кислот навеску исследуемо-
го материала (5 - 7 г) помещают в широкую пробирку и заливают 10 - 15
мл 0,5 н. HClO4, охлажденной до 0°С. Пробирку с навеской помещают в
криогидратную смесь для фиксации. После фиксации навеску с HClO4 пе-
реносят в фарфоровую ступу, тщательно растирают стеклянным песком до
гомогенного состояния и прокачивают на ротаторе 30 минут при понижен-
ной температуре. Полученный гомогенат центрифугируют в течение 5 ми-
нут при 3000 об/мин. Экстракт сливают и ставят в холодильник. Осадок
заливают 10 мл 0,5 н. HClO4 и прокачивают еще 30 минут при 0°С, а затем
центрифугируют при тех же условиях. Экстракты объединяют в мерной
колбе или цилиндре, а осадок трижды промывают холодной дистиллиро-
ванной водой. Промывные воды объединяют с кислотными экстрактами,
немедленно нейтрализуют 0,2 н. NaOH по фенолфталеину и доводят до оп-
ределенного объема. Образующиеся хлопья натриевой соли хлорной ки-
слоты удаляют центрифугированием. Нейтрализованный хлорнокислый
экстракт может быть использован для определения свободных адениловых
нуклеотидов.
   Остаток после удаления кислоторастворимого фосфора трижды обра-
батывают 96%-ным этанолом на холоде. Затем проводят многократную

36