Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 42 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

БФУ им. Канта | Калининград

Составители: 

Рубрика: 

41
нол-эфир. Органический фосфор щелочерастворимых фракций и фракции
горячего кислотного экстракта содержит до 95% фосфора нуклеиновых ки-
слот. Поэтому органический фосфор этих трех фракций позволяет судить о
характере накопления нуклеиновых кислот. Остаток при данных условиях
фракционирования содержит в основном фосфопротеины, следовательно,
величина остатка фосфора может характеризовать накопление фосфопро-
теинов.
При количественном учёте
неорганических полифосфатов определение
фосфора можно проводить по методу Пануша и др [2]. При использовании
этого метода может происходить некоторый гидролиз кислотолабильных
соединений, но зато он прост и быстр.
Ход определения
К 2,75 мл раствора, содержащего от 20 до 200 нМ фосфата, добавляют
1,25 мл ацетатного буфера pH (9 г уксуснокислого натрия и 0,5 мл серно-
кислой меди доводят до 100 мл 4 н уксусной кислотой ), 0,5 мл раствора
молибдата (5%-ный раствор молибдата аммония в воде) и 0,5 мл метольно-
го реактива (0,2%-ный раствор метола в 5%-ном растворе сульфата на-
трия). Через 60
минут измеряют поглощение раствора на спектрофотомет-
ре при длине волны 960 нм с кислородно-кадмиевым элементом. Количе-
ство фосфора в пробе определяют по калибровочной кривой.
Для определения Р
7
и Р
30
к 1 мл пробы добавляют 1 мл 2 н. HCl. Рас-
твор гидролизуют 7 и 30 минут соответственно при 100
o
С, после чего бы-
стро охлаждают и проводят определение фосфора, как описано выше.
Для определения общего фосфора к части пробы добавляется 0,5 мл
концентрированной HClO
4
и 10 мл H
2
SO
4
. После упаривания при 120
o
С
проба сжигается при 200
o
С до полного обесцвечивания. Нейтрализованную
после сжигания пробу доводят до определенного объема и определяют
ортофосфат.
Литература
1. Окунцов М.М., Боровик З.И., Гребенников А.С. и др. Специальный практи-
кум по биохимии и физиологии растений. Калининград, 1981. С. 23-26.
2. Panusz H.T., Graczyk G., Wilmanska D., Skarzynsky I. Analysis of orthophos-
phate-pyrophosphate, mixtures resulting prom weak, pyrophosphatase activities. //
Analyt. Biochem. 35(2). 1970. 494-504.
БЫСТРОЕ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРАТОВ
(по Д. Катальдо и др.)
Определение нитратов в растительных тканях титрованием салицило-
вой кислотой [1] можно вести в высушенном и сыром материале. В первом
случае материал фиксируется острым паром в течение 5 минут и досуши-
нол-эфир. Органический фосфор щелочерастворимых фракций и фракции
горячего кислотного экстракта содержит до 95% фосфора нуклеиновых ки-
слот. Поэтому органический фосфор этих трех фракций позволяет судить о
характере накопления нуклеиновых кислот. Остаток при данных условиях
фракционирования содержит в основном фосфопротеины, следовательно,
величина остатка фосфора может характеризовать накопление фосфопро-
теинов.
    При количественном учёте неорганических полифосфатов определение
фосфора можно проводить по методу Пануша и др [2]. При использовании
этого метода может происходить некоторый гидролиз кислотолабильных
соединений, но зато он прост и быстр.
                             Ход определения
    К 2,75 мл раствора, содержащего от 20 до 200 нМ фосфата, добавляют
1,25 мл ацетатного буфера pH (9 г уксуснокислого натрия и 0,5 мл серно-
кислой меди доводят до 100 мл 4 н уксусной кислотой ), 0,5 мл раствора
молибдата (5%-ный раствор молибдата аммония в воде) и 0,5 мл метольно-
го реактива (0,2%-ный раствор метола в 5%-ном растворе сульфата на-
трия). Через 60 минут измеряют поглощение раствора на спектрофотомет-
ре при длине волны 960 нм с кислородно-кадмиевым элементом. Количе-
ство фосфора в пробе определяют по калибровочной кривой.
    Для определения Р7 и Р30 к 1 мл пробы добавляют 1 мл 2 н. HCl. Рас-
твор гидролизуют 7 и 30 минут соответственно при 100oС, после чего бы-
стро охлаждают и проводят определение фосфора, как описано выше.
    Для определения общего фосфора к части пробы добавляется 0,5 мл
концентрированной HClO4 и 10 мл H2SO4. После упаривания при 120oС
проба сжигается при 200oС до полного обесцвечивания. Нейтрализованную
после сжигания пробу доводят до определенного объема и определяют
ортофосфат.
                              Литература
    1. Окунцов М.М., Боровик З.И., Гребенников А.С. и др. Специальный практи-
кум по биохимии и физиологии растений. Калининград, 1981. С. 23-26.
    2. Panusz H.T., Graczyk G., Wilmanska D., Skarzynsky I. Analysis of orthophos-
phate-pyrophosphate, mixtures resulting prom weak, pyrophosphatase activities. //
Analyt. Biochem. 35(2). 1970. 494-504.

   БЫСТРОЕ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРАТОВ
                  (по Д. Катальдо и др.)
   Определение нитратов в растительных тканях титрованием салицило-
вой кислотой [1] можно вести в высушенном и сыром материале. В первом
случае материал фиксируется острым паром в течение 5 минут и досуши-

                                                                               41

Страницы