Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 40 стр.

ванием, либо фильтрованием. В экстракте снова определяют оптическую
плотность при 260 нм и, если она составляет более 10% от исходной, обра-
ботку углем повторяют. После удаления нуклеотидов в экстракте опреде-
ляют: 1) ортофосфат (Рорто) непосредственно в экстракте; 2) фосфор соеди-
нений, гидролизующихся до ортофосфата в течение 7 минут (Р7) и 30 ми-
нут (Р30); 3) общий фосфор (Робщ) после сжигания части экстракта с кон-
центрированной Н2SO4 и применением в качестве катализатора НСlО4. Ко-
личество полифосфатов рассчитывают по формуле Ломана и Лангена:
                            ПФ=(Р7-Рорто) - (Р30-Р7),
где величина (Р7-Рорто) представляет собой лабильный фосфор фракции.
    Содержание стабильного фосфора, который представлен фосфором ор-
ганических соединений, находят по разности между общим фосфором и
суммой фосфора полифосфатов и ортофосфата:
                           Рорг = Робщ - (Рпф + Рорто).
    Солерастворимая фракция. После удаления кислоторастворимых со-
единений к остатку добавляют 1,5 г перхлората натрия и 1 мл 0,5 н. НСlО4
и прокачивают на холоде в течение 15 минут. После этого добавляют 15 мл
холодной дистиллированной воды и продолжают экстракцию еще 15 ми-
нут. Экстракт отделяют центрифугированием при 3000 об/мин, данная
процедура повторяется дважды. Затем осадок промывается несколько раз
холодной дистиллированной водой. Промывные воды объединяют с экс-
трактами и доводят до определенного объема. Солерастворимую фракцию
анализируют так же, как и кислоторастворимую.
    Фракция фосфолипидов. Остаток после извлечения солерастворимой
фракции трижды обрабатывают 96%-ным этанолом на холоде. Затем про-
водят многократную экстракцию смесью этанол-серный эфир (3:1) при
комнатной температуре до полного извлечения пигментов. Последний раз
остаток промывают эфиром и высушивают в вакуум-эксикаторе. Все спир-
товые и спирт-эфирные экстракты объединяют в мерной колбе и доводят
до метки. В этой фракции определяют общий фосфор после сжигания час-
ти экстракта в концентрированной H2SO4 и НСlО4. По общему фосфору
фракции судят о содержании фосфолипидов:
                                 Робщ = Рлипидов.
    Щелочерастворимая фракция, рН 8-9. К остатку после удаления липи-
дов добавляют несколько миллилитров холодной дистиллированной воды
и с помощью 0,2 н. NaOH доводят рН раствора до 8-9 при 00С. Экстракцию
проводят в течение 40 минут при постоянном перемешивании. Затем экс-
тракт отделяют центрифугированием. К остатку добавляют небольшое ко-
личество холодной дистиллированной воды и оставляют еще на 40 минут.
Экстракт вновь отделяют центрифугированием. Остаток тщательно про-
                                                                       39