Введение в прикладную биотехнологию. Ефимова М.В. - 23 стр.

                  3.2. КЛЕТОЧНАЯ ИНЖЕНЕРИЯ


    3.2.1. Клонирование культур тканей и клеток высших растений

     Создание культур растительных клеток стало возможным после то-
го, как были разработаны соответствующие среды и режимы культиви-
рования.
     В культуре тканей определенного вида растений в результате деле-
ния дифференцированных клеток образуются недифференцированные
вакуолизированные клетки, которые растут хаотично и образуют кле-
точную массу – каллус. Каллус образуется на питательных средах, со-
держащих минеральные и органические питательные вещества, витами-
ны, сахароспирты, ауксины, а иногда и цитокинины (гормоны роста).
После нескольких пересадок каллус может приспосабливаться к росту
без фитогормонов, которые начинают синтезировать клетки.
     Клетки растений можно культивировать и в жидких питательных
средах. Такие культуры называют суспензионными.
     Соматические клетки растений являются тотипотентными, т. е. от
клеток, изолированных из разных тканей растений, можно регенириро-
вать целое растение. Если к питательной среде добавить гормоны
в определенных соотношениях, можно индуцировать рост побегов
и корневой системы. Ауксины стимулируют рост корней, цитокинины –
образование конуса роста и побегов. Чтобы образовались и корни,
и побеги, ауксины и цитокинины должны быть взяты в определенных
соотношениях.
     Метод применяют тогда, когда имеются трудности в половом раз-
множении сорта или когда получен удачный гибрид, но его свойства
нельзя сохранить, размножая половым путем. Для размножения деревь-
ев используют клетки молодых листьев с верхушки дерева без повреж-
дения верхушечной почки.
     Протопласты (содержимое растительной клетки) растений впервые
были получены в 1971 г. в лаборатории И. Токебе. Для разрушения кле-
точной стенки обычно используют ферментные препараты трех видов –
целлюлазу, гемицеллюлазу и пектиназу. Чтобы выделить жизнеспособ-
ные протопласты, необходим осмотический стабилизатор. В качестве
таких стабилизаторов используют сахара (глюкоза, сахароза, сорбит,
манит) либо растворы некоторых солей. Кроме осмотических свойств
среды должны быть подобраны соответсвующие факторы: рН, осве-
щенность, температура и др.
     После прекращения действия ферментов у протопластов начинает
образовываться клеточная стенка.

                                 23