Введение в прикладную биотехнологию. Ефимова М.В. - 26 стр.

        3.2.3. Особенности культивирования клеток растений

     В природных условиях клетки растений находятся в тканях и за-
щищены от механических воздействий внешней среды. Кроме того, эти
клетки нуждаются во множестве компонентов минеральной и органиче-
ской природы для метаболизма и роста.
     Для растительных клеток важное значение имеют соли азота, ка-
лия, магния, фосфора и ряд микроэлементов. Из органических веществ,
помимо углеводов, важны отдельные аминокислоты, витамины и фито-
гормоны.
     В настоящее время растительные клетки культивируют, как прави-
ло, в виде каллуса. Каллусные клетки получают из фрагментов тканей
разных органов высших растений, помещая кусочки такой ткани в пита-
тельную среду в пробирках, колбах, чашках Петри. В природных усло-
виях каллусная ткань возникает в травмированных местах для анатоми-
ческой регенерации пострадавшего органа. От инфекции каллусную
ткань в природных условиях защищают иммунные механизмы организ-
ма. В искусственных условиях необходимо строго соблюдать стериль-
ность. Через 4–6 недель культивирования в питательной среде возника-
ет первичный каллус, который необходимо перенести на свежую
питательную среду. При культивировании на агаризованной среде кусо-
чек каллуса, переносимый на свежую среду, должен иметь массу около
60–100 мг. Такие кусочки ткани переносят на 30–40 см3 свежей среды.
Каллусная ткань, выросшая на поверхности твердой питательной среды,
имеет аморфную структуру, представляющую собой массу тонкостен-
ных клеток. При длительной пересадке каллусные ткани, имеющие пер-
воначальную белую, желтоватую, зеленую или красную пигментацию,
могут терять окраску, а структура ткани становится более рыхлой.
     Каллусные клетки после ряда делений переходят на обычный для
данного растения цикл развития, т. е. начинается их дифференцировка.
Этот процесс регулируется гормонами.
     Клетки растений можно культивировать и глубинным методом в
жидкой среде. Для этого необходимо получить линии клеток, образую-
щих небольшие агрегаты по 5–10 клеток. Для глубинного культивиро-
вания более пригодны рыхлые каллусные ткани. Трансплантант жела-
тельно обрабатывать пектиназой. Рекомендуется использовать среды,
содержащие 2-, 4-дихлорфеноксиуксусную кислоту и не содержащие
ионы кальция. В таких средах агрегаты клеток не образуются. Перед
пересевом первичную культуру фильтруют через два слоя марли или
через нейлоновые либо металлические сита, чтобы отделить крупные
агрегаты каллусной ткани и остатки трансплантанта. На образование
клеточных агрегатов оказывает также влияние интенсивность переме-
шивания среды. Глубинное культивирование можно осуществить в кол-
                                26