Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 38 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

38
рассчитано из стандартов, используя значения C
T
образцов. Если способ
расчета по стандартам невозможен, то количество шаблона в одном образ-
це может быть вычислено относительно другого образца на основании
разницы в значениях C
T
– ΔC
T
.
В настоящее время разработано большое количество программного
обеспечения, которое автоматически генерирует стандартные кривые для
абсолютного количественного анализа, если стандарты заданы в настройке
плашки. Кроме того, программное обеспечение также оценивает эффек-
тивность реакции и вычисляет значения ΔC
T
для анализа относительных
значений.
Два основных принципа обработки данных ПЦР в реальном времени:
1.
Метод калибровочного графика.
2.
Прямое сравнение данных.
Метод калибровочного графика
Этот метод предполагает построение калибровочного графика в ко-
ординатах
C(T) – log P
0
с серией разведений ДНК-стандарта, из которого
находят концентрацию субстрата (
P
0
) в экспериментальных образцах.
Точность метода зависит от того, насколько условия ПЦР (и, прежде
всего, эффективность амплификации) серии стандартов близки к условиям
ПЦР экспериментальных образцов. Поэтому при выборе стандартов необ-
ходимо руководствоваться следующими правилами:
1.
Содержание примесей в стандартном препарате должно быть
сходно с таковым в экспериментальном препарате.
2.
Доля амплифицируемого фрагмента в стандартной ДНК долж-
на быть близка к таковой в экспериментальной ДНК.
3.
Серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь
диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК. 
рассчитано из стандартов, используя значения CT образцов. Если способ
расчета по стандартам невозможен, то количество шаблона в одном образ-
це может быть вычислено относительно другого образца на основании
разницы в значениях CT – ΔCT.
     В настоящее время разработано большое количество программного
обеспечения, которое автоматически генерирует стандартные кривые для
абсолютного количественного анализа, если стандарты заданы в настройке
плашки. Кроме того, программное обеспечение также оценивает эффек-
тивность реакции и вычисляет значения ΔCT для анализа относительных
значений.
     Два основных принципа обработки данных ПЦР в реальном времени:
          1. Метод калибровочного графика.
          2. Прямое сравнение данных.

                       Метод калибровочного графика

     Этот метод предполагает построение калибровочного графика в ко-
ординатах C(T) – log P0 с серией разведений ДНК-стандарта, из которого
находят концентрацию субстрата (P0) в экспериментальных образцах.
     Точность метода зависит от того, насколько условия ПЦР (и, прежде
всего, эффективность амплификации) серии стандартов близки к условиям
ПЦР экспериментальных образцов. Поэтому при выборе стандартов необ-
ходимо руководствоваться следующими правилами:
     1.     Содержание примесей в стандартном препарате должно быть
сходно с таковым в экспериментальном препарате.
     2.     Доля амплифицируемого фрагмента в стандартной ДНК долж-
на быть близка к таковой в экспериментальной ДНК.
     3.     Серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь
диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.

                                   38

Страницы