Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 43 стр.

     ДНК, связанную с нитроцеллюлозным фильтром, можно гибридизо-
вать с радиоактивно меченым ДНК-зондом. Блоттинг по Саузерну является
исключительно полезным также и для локализации изучаемых генов в оп-
ределенных фрагментах, полученных в результате гидролиза различными
рестриктазами гибридных молекул ДНК, хромосомной ДНК и т. д.
     Аналогичным методом на нитроцеллюлозу переносят молекулы РНК
(Нозерн (северный) блоттинг) и белка (Вестерн (западный) блоттинг).
    При проведении гибридизации РНК по Нозерну, стандартные условия
блотинга по Саузерну не применимы, так как она не связывается с обыч-
ными нитроцеллюлозными и нейлоновыми мембранами. Для иммобилиза-
ции РНК вначале был предложен специальный вид бумаги с диазобензи-
локсиметилом (DMB-целлюлоза), а затем были найдены условия для неко-
валентного связывания РНК с нитроцеллюлозой (предварительная денату-
рация РНК диметилсульфоксидом, формальдегидом и др.) и разработаны
для этого подходящие нейлоновые фильтры.
     Одним из наиболее точных и современных методов анализа является
использование чипов. Они представляют собой пластинки с иммобилизо-
ванными меченными ДНК-зондами. Каждая такая пластинка может содер-
жать несколько десятков тысяч зондов, расположенных в определенной
последовательности. Метка проявляется только в спаренных двухцепочеч-
ных фрагментах. Если в исследуемом образце есть последовательности,
комплементарные последовательностям зонда, то гибридизацию можно
определить визуально или с помощью специальных приборов. Как прави-
ло, детекторы соединены с компьютером, то есть процедура считывания и
обработки информации автоматизирована.
     При подготовке ДНК-зондов включение метки в ДНК возможно
двумя основными способами:
     1) Удлинение затравки. Данный способ получения ДНК-зондов
подразумевает использование олигонуклеотида (менее 20 звеньев), ком-
                                   43