Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 44 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

44
плементарного какому-либо известному участку анализируемой ДНК.
В процессе его гибридизации с денатурированной ДНК в реакционную
смесь добавляют ДНК-полимеразу и набор всех четырех дезоксирибонук-
леозидтрифосфатов (дНТФ), один из которых несет метку. Используя оли-
гонуклеотид в качестве затравки, полимераза удлиняет растущую цепь,
встраивая в нее меченый нуклеотид. В результате образуется полинуклео
-
тидный меченый зонд.
2)
Полимеразная цепная реакция. ПЦР предусматривает наличие
двух олигонуклеотидных затравок, комплементарных участкам, фланки-
рующим выбранный район ДНК. При проведении ПЦР в присутствии нук-
леотида, несущего метку, происходит синтез ПЦР продуктов, несущих в
своем составе меченые нуклеотиды. При повторении процедуры денатура-
ции, гибридизации и полимеризации около 30 циклов можно получить не-
сколько миллионов меченых полинуклеотидов, используемых в
качестве
ДНК-зондов.
Работа 13. Использование биотин-11-dUTP для нерадиоактивного ме-
чения ДНК методом ПЦР
1) Подготовить все необходимые реагенты для проведения ПЦР.
2)
Для постановки реакции смешайте в пробирке следующие компо-
ненты:
Компоненты реакции Количество компонента на 25 мкл
смеси
смесь биотин-11-dUTP 1/3 4.0 мкл
10х ПЦР-буфер 2.5 мкл
Праймер 1 (50мкМ) 1 мкл
Праймер 1 (50мкМ) 1 мкл
Taq-полимераза 0.5–2.5 ед.
ДНК-матрица 0.02–0.15 мкг
25мМ 3.5 мкл
Деионизованная вода до 25 мкл 
плементарного какому-либо известному участку анализируемой ДНК.
В процессе его гибридизации с денатурированной ДНК в реакционную
смесь добавляют ДНК-полимеразу и набор всех четырех дезоксирибонук-
леозидтрифосфатов (дНТФ), один из которых несет метку. Используя оли-
гонуклеотид в качестве затравки, полимераза удлиняет растущую цепь,
встраивая в нее меченый нуклеотид. В результате образуется полинуклео-
тидный меченый зонд.

     2) Полимеразная цепная реакция. ПЦР предусматривает наличие
двух олигонуклеотидных затравок, комплементарных участкам, фланки-
рующим выбранный район ДНК. При проведении ПЦР в присутствии нук-
леотида, несущего метку, происходит синтез ПЦР продуктов, несущих в
своем составе меченые нуклеотиды. При повторении процедуры денатура-
ции, гибридизации и полимеризации около 30 циклов можно получить не-
сколько миллионов меченых полинуклеотидов, используемых в качестве
ДНК-зондов.


Работа 13. Использование биотин-11-dUTP для нерадиоактивного ме-
чения ДНК методом ПЦР

  1) Подготовить все необходимые реагенты для проведения ПЦР.
  2) Для постановки реакции смешайте в пробирке следующие компо-
     ненты:
Компоненты реакции                     Количество компонента на 25 мкл
                                       смеси
смесь биотин-11-dUTP 1/3               4.0 мкл
10х ПЦР-буфер                          2.5 мкл
Праймер 1 (50мкМ)                      1 мкл
Праймер 1 (50мкМ)                      1 мкл
Taq-полимераза                         0.5–2.5 ед.
ДНК-матрица                            0.02–0.15 мкг
25мМ                                   3.5 мкл
Деионизованная вода                    до 25 мкл
                                  44

Страницы