Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 53 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

53
фрагментов ДНК с помощью концевой дезоксинуклеотидилтрансферазы
достроить одноцепочечные oligo(dA)-сегменты определенной длины, а к
концам другого фрагмента – oligo(dT)-сегменты примерно такой же длины,
то при смешении полученных таким образом фрагментов происходит спа-
ривание за счет образования водородных связей между oligo(dА)- и
oligo(dT)-последовательностями. Для ковалентного соединения двух фраг-
ментов используется ДНК-лигаза.
3.
Сшивка фрагментов с разноименными липкими концами. В си-
туации, когда необходимо сшить фрагменты, образованные разными эндо-
нуклеазами рестрикции, и имеющие разные, то есть некомплементарные
друг другу липкие концы, применяют так называемые линкеры (или «пе-
реходники»). Линкеры – это химически синтезированные олигонуклеоти-
ды, представляющие собой сайты рестрикции или их комбинацию. Суще-
ствуют линкеры «тупой конец – липкий конец». При необходимости
лип-
кие концы можно превратить в тупые. Это достигается либо отщеплением
липких концов с помощью фермента – эндонуклеазы S1, которая разруша-
ет только одноцепочечную ДНК, либо липкие концы «застраивают», то
есть с помощью ДНК-полимеразы I на однонитевых липких концах синте-
зируют вторую нить.
Плазмиды – это внехромосомные автономно реплицирующиеся дву-
цепочечные кольцевые молекулы ДНК. Плазмиды встречаются практиче-
ски у всех бактерий и выполняют ряд функций: обеспечивают их собст-
венный перенос из одной клетки в другую (F-плазмиды); несут гены ус-
тойчивости к антибиотикам (R-плазмиды) или специфические наборы ге-
нов, ответственных за утилизацию необычных метаболитов (плазмиды
де-
градации). Есть плазмиды, в которых не обнаружены гены, выполняющие
какие-то определенные функции (критические плазмиды; от англ.
cryptic –
скрытый, латентный). Размеры плазмид варьируют от менее 1 до более
500 т.п.н. Каждая из них содержит сайт начала репликации (
ori), без кото-
фрагментов ДНК с помощью концевой дезоксинуклеотидилтрансферазы
достроить одноцепочечные oligo(dA)-сегменты определенной длины, а к
концам другого фрагмента – oligo(dT)-сегменты примерно такой же длины,
то при смешении полученных таким образом фрагментов происходит спа-
ривание за счет образования водородных связей между oligo(dА)- и
oligo(dT)-последовательностями. Для ковалентного соединения двух фраг-
ментов используется ДНК-лигаза.
  3. Сшивка фрагментов с разноименными липкими концами. В си-
туации, когда необходимо сшить фрагменты, образованные разными эндо-
нуклеазами рестрикции, и имеющие разные, то есть некомплементарные
друг другу липкие концы, применяют так называемые линкеры (или «пе-
реходники»). Линкеры – это химически синтезированные олигонуклеоти-
ды, представляющие собой сайты рестрикции или их комбинацию. Суще-
ствуют линкеры «тупой конец – липкий конец». При необходимости лип-
кие концы можно превратить в тупые. Это достигается либо отщеплением
липких концов с помощью фермента – эндонуклеазы S1, которая разруша-
ет только одноцепочечную ДНК, либо липкие концы «застраивают», то
есть с помощью ДНК-полимеразы I на однонитевых липких концах синте-
зируют вторую нить.
     Плазмиды – это внехромосомные автономно реплицирующиеся дву-
цепочечные кольцевые молекулы ДНК. Плазмиды встречаются практиче-
ски у всех бактерий и выполняют ряд функций: обеспечивают их собст-
венный перенос из одной клетки в другую (F-плазмиды); несут гены ус-
тойчивости к антибиотикам (R-плазмиды) или специфические наборы ге-
нов, ответственных за утилизацию необычных метаболитов (плазмиды де-
градации). Есть плазмиды, в которых не обнаружены гены, выполняющие
какие-то определенные функции (критические плазмиды; от англ. cryptic –
скрытый, латентный). Размеры плазмид варьируют от менее 1 до более
500 т.п.н. Каждая из них содержит сайт начала репликации (ori), без кото-
                                   53

Страницы