Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 52 стр.

  1. Сшивка фрагментов с липкими концами. Этот метод является са-
мым распространенным и популярным. В результате обработки ДНК рест-
риктазами, образующими липкие концы. Эти комплементарные друг другу
участки имеют тенденцию к ассоциации за счет спаривания оснований, и
поэтому их называют комплементарными или липкими концами. Спарива-
ние оснований происходит только между комплементарными последова-
тельностями, образовавшимися под действием одной и той же рестрикта-
зы, за счет образования водородных связей между однонитиевыми участ-
ками комплементарных нуклеотидов. Также места расщепления можно со-
единить с помощью ДНК-лигазы.




  Рис. 15. Схема проведения рестрикции с образованием липких концов
                     и последующим лигированием


  2. Сшивка фрагментов с тупыми концами. Тупые концы также мо-
гут быть соединены за счет действия ДНК-лигазы, если и лигаза, и тупые
концы присутствуют в реакционной смеси в высоких концентрациях.
В этом случае реакция лигирования имеет свои особенности и ее эффек-
тивность ниже, чем при сшивке по липким концам. Для этого используют
фермент-концевую трансферазу, которая присоединяет нуклеотиды к 3'-
концам цепей ДНК. Если к 3'-концам одного из рекомбинируемых in vitro

                                  52