Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 54 стр.

рого репликация плазмиды в клетке-хозяине невозможна. Некоторые
плазмиды представлены в клетке 10–100 копиями; они называются высо-
кокопийными. Низкокопийные плазмиды присутствую в клетке в числе 1–
4 копий.




 Рис. 16. Плазмидный вектор pGEM-T. Слева обозначен сайт рестрикции
                        с указанием рестриктаз

     Как автономно реплицирующиеся генетические элементы плазмиды
обладают всеми основными свойствами, которые позволяю использовать
их в качестве вектора для переноса клонируемой ДНК: 1) небольшой раз-
мер, поскольку эффективность переноса экзогенной ДНК в Е. coli значи-
тельно снижается при длине плазмиды более 15 т.п.н.; 2) наличие уникаль-
ного сайта рестрикции, в который может быть осуществлена вставка; 3)
наличие одного или более селективных генетических маркеров для иден-
тификации реципиентных клеток, несущих рекомбинантную ДНК.
     Полученную рекомбинантную плазмиду необходимо ввести в клет-
ку-хозяина (как правило, Е. coli). Этот процесс называется трансформацией.
Обычные бактериальные клетки практически не подвергаются трансфор-
мации, т. к. проникновению ДНК внутрь клетки мешает клеточная стенка и
мембрана. Бактериальные клетки, способные трансформироваться, назы-
ваются компетентными.
                                    54