Химико-токсикологический анализ на группу веществ, изолируемых экстракцией и сорбцией. Наркотические и другие одурманивающие средства. Евстигнеева В.П. - 35 стр.

                                   35

                    Производные 1,4-бензодиазепина

      I.Изолирование.    20 мл мочи подщелачивают NaOH до рН 10.
Экстрагируют дважды хлороформом двойным объемом. Органический
растворитель упаривают в токе теплого воздуха.
      Хроматографическая очистка и обнаружение. Система для
хроматографирования - хлороформ – диоксан – ацетон – 25%-ный раствор
аммиака (45:47,5:5:2,5).
      Реагенты, используемые для проявления пластинки.
      Проявляют пластинку реактивом Драгендорфа. Производные 1,4-
бензодиазепина обнаруживаются в виде оранжево-коричневых пятен.

      Вследствие особенностей распределения и метаболизма производных 1,4-
бензодиазепина, их определение целесообразно проводить по продуктам их
гидролиза – аминобензофенонам. Это позволяет определять общее количество
препаратов (как сумму нативного соединения и его метаболитов) в
биологической жидкости.
      II.Изолирование. К 10 мл анализируемой мочи или 2 мл крови добавляют
соответственно 10 мл и 2 мл концентрированной НСl и нагревают в колбе с
обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 1 часа
(кислотный гидролиз).
      По окончании реакции гидролизат нейтрализуют насыщенным раствором
NaOH, доводят рН до 8-10 и экстрагируют дважды хлороформом (10 мл х 2 для
мочи и 5 мл х 2 для крови). Слой органического растворителя отделяют на
делительной воронке, а затем в объединенных экстрактах упаривают
органический растворитель под струей теплого воздуха до объема в несколько
капель для ТСХ-анализа и досуха для количественного определения.
      Хроматографическая очистка и обнаружение. Остаток экстракта
переносят на стартовую линию пластинки “Силуфол”. На ту же стартовую
линию наносят пятно метчиков, состоящее из смеси бензофенонов,
производных 1.4-бензодиазепина (10-15 мкг каждого). Пробег фронта
растворителя 10 см. Подвижная фаза – бензол.                 По окончании
хроматографирования бензол удаляют с пластинки током теплого воздуха.
      При концентрации бензофенонов более 5 мкг/мл, их можно обнаружить
по собственной желтой окраске или флюоресценции в УФ-свете, при меньших
концентрациях – по флюоресценции в УФ-свете и реакции окрашивания
Браттона-Маршалла.
      Реагенты, используемые для проявления пластинки.
      1. Нитрит натрия, NaNO2, свежеприготовленный 0,1%-ный раствор.
      2. Соляная кислота, НСl, 2 М раствор.
      3. Мочевина, (NH2)2CO, насыщенный раствор (для удаления избытка
          нитрита натрия). Пластинку опрыскивают через 2 минуты.
      4. N-2-нафтилэтилендиаминдихлорид (или щелочной раствор β-нафтола).
      В месте локализации аминобензофенонов появляется оранжево-красное
окрашивание.