Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 45 стр.

   2. Пак - рентгеноконтрастное вещество (аналоги: верографин, изопак, уро-
графин, уротраст, урополониум, уромиро, низотраст-370, триозил, ронпакон,
омнипак и др.).
   3. Среда 199.
   4. Стерильная дистиллированная вода.
   5. 3% раствор уксусной кислоты.
   6. Центрифуга с бакет-ротором.
   7. Ареометр с пределами измерений от 1.060 г/см до 1.090 г/см.
   8. Камера Горяева.
   9. Микроскоп.
   10. Лабораторная посуда, конические центрифужные пробирки,весы для
уравновешивания центрифужных пробирок и др.

                             Описание метода
    1. Приготовление фиколла: 4.32 (8.64) г порошка фиколла-400 растворяют в
48 (96) мл дистиллированной воды.
    2. Приготовление раствора рентгеноконтрастного вещества (например, урот-
раста): 10.14 (20.28) мл 75% раствора уротраста доводят дистиллированной во-
дой до 21 (42) мл.
    3. Приготовление градиента плотности: растворы фиколла и уротраста сме-
шивают. С помощью ареометра измеряют плотность полученного раствора, ко-
торая должна составлять 1.077 г/см. Если плотность выше, чем необходимо, то
добавляют раствор фиколла, если ниже - раствор уротраста. Градиент плотности
можно хранить в течение 30 суток при температуре + 4 в склянке из оранжевого
стекла. При отсутствии фиколла градиент плотности можно приготовить только
из одного рентгеноконтрастного вещества. С этой целью 10 (20) мл 76% раство-
ра уротраста смешать с 43.1 (86.2) мл дистиллированной воды и добавить 0.45
(0.9) мл 0.1% раствора хлористого натрия. Полученный при этом 14.3% раствор
уротраста имеет плотность 1.077 г/см и может быть использован в качестве гра-
диента плотности.
    4. Выделение лимфоцитов: периферическую кровь из локтевой вены в объе-
ме 10 мл берут в пробирку, содержащую гепарин, в конечной концентрации 25
ед в 1 мл крови. Кровь должна отстояться в течение 40-60 мин при комнатной
температуре до четкого разделения эритроцитов и плазмы.
    4а. В центрифужную пробирку наливают 2-3 мл градиента плотности, на не-
го наслаивают 4-6 мл отстоявшейся плазмы и верхний слой эритроцитов. Соот-
ношение объемов градиент: плазму выдерживают в пределах 1:2 - 1:4.
    4б. Пробирки центрифугируют в течение 40 мин в бакет-роторе с ускорени-
ем 200 g (1500-1800 об/мин) при температуре 20°С. В процессе центрифугиро-
вания эритроциты и гранулоциты “проваливаются” в градиент и оседают на дно
пробирки. На верхней границе градиента при правильном разделении образуется
рыхлое кольцо беловатого цвета, состоящее в основном из лимфоцитов с приме-
сью моноцитов. Над слоем лимфоцитов находится плазма. Плазму собирают в


                                                                          43