Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 46 стр.

отдельную пробирку для последующего анализа на иммуноглобулины; лимфо-
циты отсасывают в сухую коническую центрифужную пробирку.
    4в. К суспензии лимфоцитов добавляют 3-4 мл среды 199 и содержимое про-
бирки тщательно перемешивают. После этого пробирки центрифугируют с ус-
корением 200-300 g при температуре 20°С, затем надосадочную жидкость
удаляют, а процедуру отмывки повторяют еще один раз.
    4г. После отмывания готовят рабочую концентрацию лимфоцитов, содер-
жащую 2×10 клеток в 1 мл. Перед приготовлением рабочей концентрации
сосчитывают исходное количество лимфоцитов:
    - к 0,1 мл осадка отмытых клеток добавляют 0,9 мл среды 199, суспензию
тщательно перемешивают;
    - в чистую пробирку вносят 0,38 мл 3% раствора уксусной кислоты и 0,02 мл
взвеси лимфоцитов;
    - в камере Горяева подсчитывают лимфоциты в 100 больших квадратах и по-
лученное число умножают на 50000. Результат соответствует количеству лим-
фоцитов в 1 мл суспензии. Для приготовления рабочей концентрации лимфоци-
тов полученное число делят на 2×10, из результата вычитают 1, остаток пред-
ставляет собой количество питательной среды 199 в мл, которое необходимо
добавить в пробирку с лимфоцитами.
    Приготовленную по данной методике суспензию лимфоцитов можно хра-
нить при температуре + 4°С в течение 2 часов.


           ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА.
       ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫХ АНТИГЕНОВ Т-
                       ЛИМФОЦИТОВ

    Установлено, что на клеточной поверхности Т-лимфоцитов имеются специ-
фические антигенные детерминанты (дифференцировочные антигены), позво-
ляющие выявлять субпопуляции этих клеток. В настоящее время одним из наи-
более точных методов определения Т-лимфоцитов и их субпопуляций является
непрямая иммунофлюоресцентная реакция с моноклональными антителами, по-
лученными к дифференцировочным антигенам, локализованным на поверхности
лимфоцитов. Широкое диагностическое применение получили мышиные моно-
клональные антитела ОКТ. СD3+ выявляют более 95% периферических Т-лим-
фоцитов, CD4+ - 55-65% периферических Т-хелперов/Т-амплификаторов, CD8+ -
34-35% периферических Т-супрессоров/цитотоксических Т-лимфоцитов. Име-
ются также и другие моноклональные антитела (OKТ5, OKТ6, OKТ11 и т.д.).
Применение данных реагентов основано на способности моноклональных анти-
тел фиксироваться на поверхности жизнеспособных клеток, выявляя специфиче-
ские антигенные детерминанты после дополнительной обработки лимфоцитов
антимышиными иммуноглобулинами, меченными флюоресцеинизотиоцианатом
(ФИТЦ).



44