Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 48 стр.

вают круговыми движениями последовательно в трех сосудах с охлажденным
ЗФР. Мазок подсушивают фильтровальной бумагой (не касаясь монослоя кле-
ток). На мазок лимфоцитов наносят один из растворов моноклональных антител,
содержащий 3 мкг/мл OKТ3, OKТ4 или OKT8 в ЗФР и инкубируют во влажной
камере в течение 40 мин при комнатной температуре. По окончании инкубации
препарат осторожно промывают в трех сменах охлажденного ЗФР. На мазок на-
носят 10-15 мкл кроличьего антимышиного иммуноглобулина, меченного
ФИТЦ, разведенного 1:50 в ЗФР, и инкубируют во влажной камере в течение 30
мин при комнатной температуре. Препарат промывают в трех сменах охлажден-
ного ЗФР. На мазок наносят 10-15 мкл 0,0004% (1 мг в 250 мл дистиллированной
воды) этидиума бромида; стекло слегка подогревают, проводя несколько раз над
пламенем горелки. Препарат промывают в трех сменах охлажденного ЗФР. Уда-
ляют фильтровальной бумагой избыток жидкости и на мазок наносят 50% рас-
твор глицерина в ЗФР; препарат накрывают покровным стеклом и с помощью
фильтровальной бумаги удаляют избыток глицерина.С целью сохранения препа-
рата от высыхания края покровного стекла окантовывают расплавленным пара-
фином.

                             Учет результатов
    Препарат анализируют с помощью люминесцентного микроскопа (последо-
вательность фильтров, начиная от ртутной лампы: ЗСС, ЗСС 24, ФС-1, БС-8). В
поле зрения микроскопа видны лимфоциты, ядро которых светится кирпично-
красным цветом, а антительный комплекс, связавшийся с поверхностными ре-
цепторами клеток, имеет точечное свечение изумрудно-зеленого цвета. Клетки,
имеющие диффузное изумрудно-зеленое или чисто зеленое свечение, являются
мертвыми и при анализе не учитываются.
    В нескольких полях зрения сосчитывают общее число лимфоцитов и среди
них количество клеток, имеющих точечное изумрудно-зеленое свечение.
    Процент лимфоцитов, имеющих на своей поверхности дифференцировочные
антигены CD3+, CD4+,CD 8+ определяют после подсчета 200 клеток.
    По результатам подсчета количества CD4+ и CD 8+ лимфоцитов, т. е. Т-
хелперов и Т-супрессоров, рассчитывают индекс дифференцировки лимфоцитов
(ИД): CD4+/CD8+.

          РЕАКЦИЯ ТОРМОЖЕНИЯ МИГРАЦИИ ЛЕЙКОЦИТОВ

    Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в присутствии митогена
- конканавалина А (Кон А) является одним из методов определения функцио-
нального состояния Т-системы иммунитета. Реакция основана на способности
Т-лимфоцитов в присутствии митогена выделять биологически активные веще-
ства - лимфокины, в том числе факторы, ингибирующие миграцию лейкоцитов.

                          Материалы и реактивы


46