Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 54 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

БФУ им. Канта | Калининград

Составители: 

Рубрика: 

52
4. 0,83 % раствор хлористого аммония.
5. Центрифуга с бакет-ротором.
6. Термостат.
7. Микроскоп.
8. Камера Горяева
9. Силиконированные пробирки.
Описание метода
Венозную кровь в объеме 2-3 мл набирают в пробирку с гепарином в соот-
ношении 10-20 ЕД гепарина на 1 мл крови. В кровь добавляет 10 % раствор же-
латины в пропорции - на 1 мл крови 0,1 мл желатина и помещают
в термостат на
30-40 минут при 37°С. После отстаивания надосадок, состоящий из лейковзвеси
отсасывают в отдельную пробирку и добавляют 0,83 % раствор хлористого ам-
мония для лизирования примеси эритроцитов. Далее лейковзвесь трижды отмы-
вают средой 199 или раствором Хенкса в центрифуге по 5-10 минут при ускоре-
нии 100-200 g (500-1500 об/мин). Осадок лейкоцитов ресуспендируют в среде
199 и доводят концентрацию до 5×10 в мл. Все манипуляции с клетками с целью
сокращения потерь производят в силиконированной посуде.
ИССЛЕДОВАНИЕ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ
ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ
Материалы и оборудование
1. Монодисперсные частицы латекса.
2. Метанол.
3. Краска по Романовскому-Гимза.
4. Предметные стекла.
5. Пластиковые планшеты для иммунологических реакций.
Описание метода
В силиконированные
пробирки или планшеты помещают 0,1 мл лейковзвеси
и добавляют 0,2 мл монодисперсных частиц латекса в концентрации 5×10 /мл.
Оптимальное соотношение количества клеток и частиц латекса составляет 1:100.
Смесь перемешивают и помещают в термостат на 30 минут при температуре
37°С. После инкубации трижды отмывают средой 199 и готовят препарат. Вы-
сушенный препарат фиксируют метанолом и окрашивают
по Романовскому-
Гимза.
Учет результатов
В препаратах подсчитывают удельное и абсолютное содержание фагоцити-
рующих клеток (возможен вариант для специальных исследований: подсчет для
моноцитов и нейтрофилов отдельно) - фагоцитарный показатель (ФП), среднее 
     4. 0,83 % раствор хлористого аммония.
     5. Центрифуга с бакет-ротором.
     6. Термостат.
     7. Микроскоп.
     8. Камера Горяева
     9. Силиконированные пробирки.
                                Описание метода
    Венозную кровь в объеме 2-3 мл набирают в пробирку с гепарином в соот-
ношении 10-20 ЕД гепарина на 1 мл крови. В кровь добавляет 10 % раствор же-
латины в пропорции - на 1 мл крови 0,1 мл желатина и помещают в термостат на
30-40 минут при 37°С. После отстаивания надосадок, состоящий из лейковзвеси
отсасывают в отдельную пробирку и добавляют 0,83 % раствор хлористого ам-
мония для лизирования примеси эритроцитов. Далее лейковзвесь трижды отмы-
вают средой 199 или раствором Хенкса в центрифуге по 5-10 минут при ускоре-
нии 100-200 g (500-1500 об/мин). Осадок лейкоцитов ресуспендируют в среде
199 и доводят концентрацию до 5×10 в мл. Все манипуляции с клетками с целью
сокращения потерь производят в силиконированной посуде.


             ИССЛЕДОВАНИЕ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ
                       ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ

                         Материалы и оборудование
     1. Монодисперсные частицы латекса.
     2. Метанол.
     3. Краска по Романовскому-Гимза.
     4. Предметные стекла.
     5. Пластиковые планшеты для иммунологических реакций.

                              Описание метода
   В силиконированные пробирки или планшеты помещают 0,1 мл лейковзвеси
и добавляют 0,2 мл монодисперсных частиц латекса в концентрации 5×10 /мл.
Оптимальное соотношение количества клеток и частиц латекса составляет 1:100.
Смесь перемешивают и помещают в термостат на 30 минут при температуре
37°С. После инкубации трижды отмывают средой 199 и готовят препарат. Вы-
сушенный препарат фиксируют метанолом и окрашивают по Романовскому-
Гимза.

                              Учет результатов
   В препаратах подсчитывают удельное и абсолютное содержание фагоцити-
рующих клеток (возможен вариант для специальных исследований: подсчет для
моноцитов и нейтрофилов отдельно) - фагоцитарный показатель (ФП), среднее

52

Страницы