Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 53 стр.

    Приготовление 0,1 М боратного буфера: 3,410 г борной кислоты и 4,275 г
тетрабората натрия смешивают, переносят в мерную колбу и доводят до 1 л дис-
тиллированной водой, рН 8,4.
    Сыворотку крови в объеме 200 мкл смешивают с 5 мл 0,1 М боратного буфе-
ра. 4 мл смеси приливают к 4 мл 7% раствора полиэтиленгликоля, приготовлен-
ного на 0,1 М боратном буферном растворе. Пробу инкубируют 18-20 часов при
температуре 4°С. После инкубации смесь центрифугируют при 2000 об/мин в
течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют, препарат дважды отмывают
7% раствором полиэтиленгликоля на 0,1 М боратном буфере и растворяют в 5
мл 0,1 N раствора едкого натра.

                             Учет результатов
    Уровень циркулирующих иммунных комплексов определяют с помощью
спектрофотометра при длине волны - 280 нм и выражают в единицах оптической
плотности.
    Поскольку в настоящее время многие лаборатории оснащены вертикальны-
ми фотометрами, возможна постановка данной реакции в модификации микро-
методом.
    Для этого исследуемую сыворотку разводят боратным буфером в 3 раза. Раз-
ведение сыворотки выполняют следующим образом.
    В лунку планшета для иммунологических реакций вносят 0,05 мл сыворотки
крови и 0,1 мл буфера.
    В параллельные лунки второго планшета вносят в первую - 0,25 мл буфера,
во вторую - 0,25 мл раствора полиэтиленгликоля. Затем в обе лунки этого план-
шета вносят по 0,05 мл разведенной сыворотки из первого планшета. Планшет
выдерживают 1 час при комнатной температуре. На вертикальном фотометре с
использованием светофильтра 450 нм определяют экстинцию. Вычисляют раз-
ность показателей сыворотки крови с полиэтиленгликолем и сыворотки с буфе-
ром и умножают на 100, что и является величиной ЦИК, выраженной в единицах
оптической плотности.

          ИССЛЕДОВАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ
                   ФАГОЦИТАРНЫХ КЛЕТОК

                          Выделение лейковзвеси

    Лейковзвесь для постановки реакции фагоцитоза и нитросинего тетразолие-
вого теста выделяют по стандартной методике из гепаринизированной крови.

                        Материалы и оборудование
   1. 10 % раствор медицинского желатина.
   2. Гепарин.
   3. Среда 199 или раствор Хенкса.

                                                                          51