Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 51 стр.

    2. П-образная рамка 120×90×8 мм для облегчения заливки стекла агаром.
    3. Водяная баня на 50-60°С.
    4. Пастеровские пипетки с оттянутым концом.
    5. Влажная камера.
    6. Измеритель.
    7. Калибровочная линейка.
    8. Коммерческие наборы для определения концентрации иммуноглобулинов
производства “СЕВАК”, ЧССР.
    9. 0,2 М вероналовый буфер.
    10. Реактив для окраски преципитатов.
    11. Пробойник круглый диаметром 1.5-2.0 мм для вырезания лунок в геле
агарозы.

                             Описание метода
    Приготовление вероналового буфера: 1,84 г веронала и 0,34 г едкого натра
растворяют в 200 мл дистиллированной воды.
    Приготовление геля агарозы: агарозу из набора для определения иммуногло-
булинов в сыворотке крови “СЕВАК” в количестве 3,6 г высыпают в 200 мл ве-
роналового буфера, подогретого до температуры 50-60°С, после чего кипятят в
течение 10-15 мин на водяной бане до полного расплавления агара и получения
прозрачного геля. Расплавленный агар фильтруют через вату и разливают по
21 мл в подогретые стеклянные цилиндры, которые закрывают пробками и по-
мещают на водяную баню с температурой 56-58°С. Ампулу моноспецифической
сыворотки с рабочим титром 1:20-1:30 разводят в 1 мл вероналового буфера,
выливают в соответствующий цилиндр, перемешивают и 10-15 мин выдержива-
ют в водяной бане.
    Стеклянные пластины размером 9×12 см протирают эфиром, на стекле по-
мещают ограничительную рамку (при отсутствии рамки края можно обработать
парафином). Подготовленные таким образом пластины подогревают и помеща-
ют на строго горизонтальную поверхность. На середину пластины из цилиндра
быстро выливают расплавленный агар, содержащий моноспецифическую сыво-
ротку. Гель с помощью стеклянной палочки быстро и равномерно распределяют
по всей поверхности стекла, пузырьки воздуха тщательно удаляют. Пластину с
гелем оставляют на горизонтальной поверхности до полного затвердения агара.
    С помощью круглого штампа по трафарету в геле вырезают лунки. Расстоя-
ние от края стекла до лунок и между лунками должно быть не менее 10 мм. На
одном стекле размером 9×12 см можно разместить до 48 лунок. Агар из лунок
удаляют пастеровской пипеткой, соединенной с вакуумным или водоструйным
насосом. Подготовленные пластины при необходимости можно хранить во
влажной камере при температуре 4°С.
    Исследуемую сыворотку с помощью пастеровской пипетки с тонко оттяну-
тым концом вносят в лунки до исчезновения вогнутого мениска. Каждую сыво-
ротку вносят в лунки агаровых пластин, содержащих ту или иную моноспеци-

                                                                          49