Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 57 стр.

       1) лабораторная посуда, дезинфектанты, стерилизаторы и др.

                             Описание метода
    Основные принципы предлагаемой методики заключаются в том, что ИФН
обладает антивирусной активностью, проявляющейся в торможении репродук-
ции вируса и, следовательно, в ингибировании его цитопатического действия
(ЦПД), проявляющегося в деструкции монослоя клеток после их инкубации с
вирусом. Торможение развития ЦПД можно охарактеризовать количественно,
окрашивая клеточный монослой после инкубации с ИФН-содержащими проба-
ми, и индикаторным вирусом. Количество абсорбированного клетками красите-
ля обратно пропорциональны степени развития ЦПД и прямо пропорциональны
содержания ИФН в исследуемых пробах.
    Основные стадии анализа: 1) получение монослойной клеточной культуры;
2) преинкубация клеточного монослоя с ИФН-содержащими пробами; 3) инку-
бация клеточного монослоя с раствором индикаторного вируса; 4) учет резуль-
татов анализа (окраска лунок с клетками и определение степени деструкции мо-
нослоя).

              Забор крови и подготовка анализируемых проб

    В стерильные пробирки, в которые предварительно внесено необходимое
количество стерильного антикоагулянта (гепарин, трилон В и др. нетоксичные
антикоагулянты) в виде концентрированного (для исключения разбавления ис-
ходного образца) раствора на среде RPMI-1640 или на физиологическом раство-
ре, так, чтобы конечная концентрация антикоагулянта, например для гепарина,
составила 15-20 ед., отбирается венозная кровь объемом от 0,5 до 2 мл. Ото-
бранная таким образом кровь может храниться 5-6 часов при +4°С без потери
всех необходимых свойств.

                     Подготовка анализируемых проб

    В соответствии с литературными данными, универсальными показателями,
наиболее полно отражающими состояние системы интерферона, являются:
    1) содержание общего сывороточного интерферона (sИФН);
    2) количественное определение способности лейкоцитов крови продуциро-
вать α-интерферон (ИФН-α) и у-интерферон (ИФН-γ) в ответ на специфическое
индуцирующее воздействие (индукция ИФН-α, ИФН-γ). Для анализа вышепере-
численных параметров цельную кровь необходимо обработать следующим обра-
зом:
    а) в стерильные эппендорфы вносится Среда RPMI-1640 с добавлением глу-
       тамина, антибиотиков (пенициллин и стрептомицин по 100 ед/мл), 2% сы-
       воротки крупного рогатого скота (КРС); растворы индукторов интерферо-
       на (вирус NDV для ИФН-α и СЭА для ИФН-γ) и цельная кровь в соотно-
       шении 8/1/1 (например, 200 мкл RPMI-1640, 25 мкл раствора индуктора,

                                                                          55