Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 58 стр.

        25 мкл цельной крови). Полученная индукционная смесь инкубируется
        при 37°С в течение 24 часов, затем в эппендорфы, в которых производится
        индукция ИФН-α, добавляется 0,1 н. раствор HCL до рН 2,0, и проба ин-
        кубируется в течение 1 часа при 37°С, после чего в нее вносится 0,1 н.
        раствор NаОН до рН 7,4. Обработанные таким образом пробы с индуци-
        рованным ИФН-α и ИФН-γ замораживаются и хранятся при -25°С.
     б) цельная кровь центрифугируется при 1000 g, после чего в стерильный эп-
        пендорф отбирается 50-200 мкл сыворотки для анализа содержания обще-
        го сывороточного интерферона (sИФН). Отобранная сыворотка заморажи-
        вается и хранится при -25°С.

                             Постановка анализа

    Получение монослоя клеток. В стерильные микропланшеты для культур
клеток, предварительно обработанные УФО в течение 1,5-2 часов, вносится сус-
пензия клеток L-41 в ростовой питательной среде (РС) концентрацией 500000
клеток/мл из расчета 100 мкл суспензии в лунку. Ростовая среда представляет
собой среду Игла, содержащую 10% сыворотки КРС, глутамин (300 мг/л), анти-
биотики (пенициллин, стрептомицин по 100 ед/мл). Засеянные микропланшеты
помещаются в CO-термостат при 37°С до образования полного монослоя клеток
(при соблюдении указанных условий монослой образуется через 24 часа).

        Подготовка проб индуцированных ИФН-α и ИФН-γ к анализу

    После образования полного монослоя в микропланшеты вносятся интерфе-
ронсодержащие пробы. Непосредственно перед анализом пробы, содержащие
индуцированный ИФН-γ центрифугируют при 1500 g в течение 10-15 мин для
осаждения клеточных элементов; пробы, содержащие индуцированный ИФН-α
центрифугируют при 3000-4000 g в течение 20-30 мин для осаждения выпавших
в осадок белков и клеточных элементов.

                     Титрование ИФН-содержащих проб

    Титрование интерферонсодержащих проб производится во вспомогательных
96-луночных микропланшетах (можно использовать планшеты для иммунологи-
ческих реакций, иммуноферментного анализа и др., объем лунок которых не ме-
нее 300 мкл), предварительно обработанных УФО в течение 1,5-2 часов.
    Титрование ИФН-содержащих проб осуществляется следующим образом: в
лунки вспомогательного микропланшета 8-канальной микропипеткой вносится
по 150 мкл поддерживающей питательной среды (ПС), являющейся полным ана-
логом РС, но содержащей только 2% сыворотки КРС, вместо 10%. После этого в
лунки ряда “А” последовательно вносятся анализируемые пробы в количестве
150 мкл и раститровываются по лункам рядов “В”-”Н” соответствующих столб-


56