Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 59 стр.

цов перенесением в каждую последующую лунку 150 мкл пробы, так, что коэф-
фициент разведения от лунки к лунке равен 2.
    При этом далеко не всегда целесообразно начинать титрование проб с разве-
дения “2” (вносить в лунки ряда “А” по 150 мкл анализируемой пробы), так как
обычно анализируемые пробы обычно содержат не менее 8-10 МЕ/мл ИФН. По-
этому в целях уменьшения количества материала, отбираемого для анализа (ве-
нозной или капилярной крови), возможно внесение в лунки ряда “А” 30 или 60
мкл пробы (с предварительным внесением в лунки ряда “А” 270 или 240 мкл ПС
соотв.), так, чтобы общий объем смеси в лунках ряда “А” равнялся 300 мкл, как
и в случае титрования начиная с разведения 1:2, но при выполнении данных ус-
ловий внесения проб первоначальное разведение составит 1:5 (или 1:10 соотв.).
Раститровка проб осуществляется также перенесением 150 мкл в каждую после-
дующую лунку с падением концентрации ИФН в 2 раза (от лунок ряда “А” к
лункам ряда “Д” концентрация изменяется соответственно как: 1:5; 1:10; 1:20;
1:40 или 1:10; 1:20; 1:40; 1:80).Такая схема титрования позволяет снизить коли-
чество лунок на один анализ (4 лунки на одну параллельную аналитическую
точку) при использовании при учете результатов анализа с применением мето-
дики получения кривой количественной зависимости поглощения специфиче-
ского красителя клетками от содержания ИФН в инкубационной среде (см. ни-
же).
    Таким образом, в каждой лунке вспомогательного микропланшета содер-
жится по 150 мкл пробы необходимого разведения.
    Для удобства и унифицирования анализа пробы рекомендуется располагать в
микропланшетах следующим образом:
    1) столбцы 1 и 2 рядов “А” - “G”: референс препарат ИФН с рядом верти-
кального падения концентрации: 50, 25, 12,5, 6,25, 3,13, 1,56, 0,76 МЕ/мл;
    2) столбцы 1 и 2 ряда “Н”: не содержащие ИФН контрольные пробы (ПС)
для контроля протекания процесса развития цитопатического действия (ЦПД)
индикаторного вируса;
    3) столбцы 3 - 12 рядов “А” - “Н”: раститрованные в 4-х или 8-ми лунках
анализируемые пробы.
    После проведения титрования исследуемых ИФН-содержащих проб во
вспомогательном микропланшете анализируемый материал переносится в мик-
ропланшеты с выращенным монослоем клеток (опытные микропланшеты). Для
этого непосредственно перед перенесением из опытных микропланшетов с клет-
ками вытряхивается ростовая среда (или же отсасывается специальным вакуум-
ным устройством), остатки РС вытряхиваются на стерильную бумажную или
тканевую салфетку, и в лунки опытных микропланшетов 8-канальной микропи-
петкой переносится по 100 мкл опытных образцов в строгом соответствии с рас-
положением их во вспомогательных микропланшетах.
    Затем опытные микропланшеты, содержащие клеточный монослой с нане-
сенными анализируемыми пробами помещаются в СО-термостат при 37°С на 24
часа.


                                                                            57