Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 61 стр.

бавления в каждую лунку микропланшета 100 мкл 30% этанола и 1-часовой экс-
тракцией красителя при 37°С. После этого из каждой лунки 75 мкл экстракта
переносится 8-канальной микропипеткой в микропланшет для иммунофермент-
ного анализа (ИФА) и последующим сканированием микропланшета на ридере
для ИФА. Измерения проводятся при длине волны, как можно более близкой к
590 нм (максимум поглощения раствора кристаллического фиолетового в 30%
этаноле). После получения значений величин оптической плотности экстракта
строится калибровочная кривая зависимости степени деструкции клеточного
монослоя от концентрации интерферона, используя данные по референсу ИФН.
Затем по полученной калибровочной кривой определяется содержание ИФН в
анализируемых пробах, выраженное в международных единицах (МЕ) на мл.
При этом необходимо учитывать все коэффициенты разведения для каждого ис-
следуемого образца.
    Для исключения возможных аберраций, присущих каждой биологической
системе, иногда приводящих к появлению несистематических ошибок, рекомен-
дуется на каждом микропланшете проставлять дополнительные контрольные
точки (например, анализ sИФН и индукции ИФН-α, ИФН-γ доноров), дубли-
рующиеся на каждом очередном микропланшете. Для этого необходимо ото-
брать несколько мл сыворотки крови и провести индукцию ИФН-α, ИФН-γ в
большом объеме.


          МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛНИЯ ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 (ИЛ-2)

                       Материалы и оборудование
    1. Среда 199 (Московский институт полиомиелита и вирусных препаратов).
    2. Среда RPMI 1640 (Московский институт полиомиелита и вирусных пре-
паратов).
    3. Эмбриональная телячья сыворотка (НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи).
    4. L-глютамин.
    5. HEPES (Серова, ФРГ).
    6. Гентамицин.
    7. 2-меркаптоэтанол (Серова, ФРГ).
    8. Конканавалин А (Алаинский завод химреактивов).
    9. Форбол-12-миристат-13-ацетат (РМА).
    10. Метил-а-D-маннопиранозид (Серова, ФРГ).
    11. Н-тимидин.
    12. 0.05 М “трис”-НСL-буфер (25 мл 0,2 М раствора триоксиметиламиноме-
тана, 45 мл 0,1 н раствора НСL, 30 мл дистиллированной воды).
    13. Планшеты для иммунологических реакций Ленинградского завода меди-
цинских полимеров.
    14. Пластиковые матрасы для культивирования клеток (Нунклон, Дания).
Можно использовать стеклянные матрасы.


                                                                        59