Физико-химические методы анализа органических соединений. Карпов С.И - 74 стр.

пластинки с помощью груши или сжатого воздуха. Новую порцию раствора
наносят после высыхания предыдущей. Когда все пробы будут нанесены, а
пятна высохнут, пластина готова для проведения хроматографирования.
      б) количественное определение методом калибровочного графика.
Нанесение проб проводится, как описано выше. Калибровочные растворы
наносят в порядке возрастания концентрации флавоноидов в пробе.
      5. Хроматографирование анализируемых образцов.
      Пластину с нанесенными пробами помещают в камеру хроматогра-
фирования так, чтобы линия старта с нанесенными пятнами была выше
уровня элюента слоем сорбента вниз под углом 45–600. Камеру закрывают
крышкой и ждут, когда элюент поднимется на 2/3 высоты пластины. Хро-
матограмму вынимают из камеры, отметив карандашом высоту подъема
фронта элюента и сушат на воздухе.
      6. Проявление хроматограмм.
      Для проявления зон компонентов разделяют две параллельные серии
анализируемых растворов, разрезая пластину на две части. Каждую серию
обрабатывают различными проявителями. Для визуализации полного соста-
ва флавоноидов в качестве проявителя используют диазотированную суль-
фаниловую кислоту. Хроматограмму обрабатывают реагентами при помощи
пульверизатора. После обработки раствором пластину сушат при температу-
ре 100–105 0С в термостате в течение 1–2 мин до появления желто-
коричневых зон. Вторую хроматограмму проявляют в парах аммиака.
      7. Сканирование хроматограмм.
      Сканирование хроматограмм может осуществляться с использовани-
ем любого планшетного сканера с возможностью сканирования в полно-
цветном режиме с разрешением 300 dpi. Файл должен быть сохранен без
сжатия в формате *.bmp.
      Возможно также прямое сканирование хроматограммы в программе
«Sorbfil Videodensitometr». Для этого предварительно проводят ознаком-
ление с руководством пользователя программы.
      Сканирование хроматограммы проводят в следующем порядке:
   – в меню Файл выбирают пункт Выбор сканера;
   – после нажатия на Сканирование хроматограммы на панели инст-
   рументов на экране появляется окно сканирования. Необходимо уста-
   новить полноцветный режим сканирования с разрешением 300 dpi;
   – после сканирования необходимо сохранить изображение для его даль-
   нейшего использования в программе «Sorbfil Videodensitometr».
      8. Качественный анализ хроматограмм.
      Проводят качественный анализ хроматограмм, т. е. идентифицируют
флавоноиды по величине относительных скоростей перемещения веществ
по пластине (Rf) при использовании различных проявителей, сравнивая
величины Rf с табличными значениями Rf (ст) (табл. 3.14).

                                  74