Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 4 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

4
ТЕМА 1. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ
ФЕРМЕНТОВ
Белки – это высокомолекулярные азотсодержащие органические ве-
щества, молекулы которых построены из остатков аминокислот. В клетке
Еscherichia coli содержится около 3000 различных белков, а в организме
человека насчитывается более 100 000 разнообразных белков.
Исследования строения и функций белков предполагают наличие вы-
сокоочищенных препаратов. Получение же белка в гомогенном
состоянии –
достаточно сложная задача. Как правило, биологический материал, яв-
ляющийся источником выделения, содержит большое число белков, их
комплексов друг с другом и другими биополимерами. Близкие свойства
компонентов этой смеси требуют при выделении индивидуальных белков
использования разнообразных методов и различных их сочетаний. Трудно-
сти получения чистого белка связаны также с лабильностью
белков и
опасностью их денатурации, что сужает круг возможных методов выделения.
Работа 1. Измерение скорости ферментативной реакции
1. Общие правила работы с ферментами.
Ферменты – вещества, имеющие лабильную структуру и, как правило,
легко подвергающиеся инактивации. Поэтому при работе с ферментами
необходимо соблюдать ряд предосторожностей.
• При определении активности фермента на разных стадиях
очистки
необходимо соблюдать одни и те же условия. По возможности следует
подбирать условия, при которых фермент достаточно стабилен. рН среды и
температура должны поддерживаться в пределах зоны стабильности фер-
мента. Обычно ферментативные реакции проводят при температуре, ле-
жащей в пределах 25–40 °С. Температура 25 °С соответствует стандарт-
ной, которой обычно придерживаются в большинстве
случаев при опреде-
лении ферментативной активности.
• Обычно выделение и очистку ферментов проводят в холодной ком-
нате при температуре 0–4 °С.
• Часто на различных стадиях выделения и очистки ферментов необхо-
димо интенсивное перемешивание ферментного раствора. Однако многие
ферменты подвергается денатурации на поверхности раздела. Поэтому 
    ТЕМА 1. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ
                     ФЕРМЕНТОВ

    Белки – это высокомолекулярные азотсодержащие органические ве-
щества, молекулы которых построены из остатков аминокислот. В клетке
Еscherichia coli содержится около 3000 различных белков, а в организме
человека насчитывается более 100 000 разнообразных белков.
    Исследования строения и функций белков предполагают наличие вы-
сокоочищенных препаратов. Получение же белка в гомогенном состоянии –
достаточно сложная задача. Как правило, биологический материал, яв-
ляющийся источником выделения, содержит большое число белков, их
комплексов друг с другом и другими биополимерами. Близкие свойства
компонентов этой смеси требуют при выделении индивидуальных белков
использования разнообразных методов и различных их сочетаний. Трудно-
сти получения чистого белка связаны также с лабильностью белков и
опасностью их денатурации, что сужает круг возможных методов выделения.

       Работа 1. Измерение скорости ферментативной реакции

    1. Общие правила работы с ферментами.
    Ферменты – вещества, имеющие лабильную структуру и, как правило,
легко подвергающиеся инактивации. Поэтому при работе с ферментами
необходимо соблюдать ряд предосторожностей.
   • При определении активности фермента на разных стадиях очистки
необходимо соблюдать одни и те же условия. По возможности следует
подбирать условия, при которых фермент достаточно стабилен. рН среды и
температура должны поддерживаться в пределах зоны стабильности фер-
мента. Обычно ферментативные реакции проводят при температуре, ле-
жащей в пределах 25–40 °С. Температура 25 °С соответствует стандарт-
ной, которой обычно придерживаются в большинстве случаев при опреде-
лении ферментативной активности.
   • Обычно выделение и очистку ферментов проводят в холодной ком-
нате при температуре 0–4 °С.
   • Часто на различных стадиях выделения и очистки ферментов необхо-
димо интенсивное перемешивание ферментного раствора. Однако многие
ферменты подвергается денатурации на поверхности раздела. Поэтому
                                   4

Страницы