Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 5 стр.

следует избегать сильного вспенивания при перемешивании. Для избега-
ния возникновения пены ферментный раствор следует переливать из одно-
го сосуда в другой осторожно, по стенке.
   • Часто даже при наиболее благоприятных условиях наблюдается мед-
ленная инактивация фермента со временем. В связи с этим рекомендуется
проводить очистку фермента как можно быстрее.
   • В состав ферментных растворов нередко вводят стабилизаторы. Ста-
билизации ферментов, как правило, способствует добавление глицерина,
альбумина. Наличие в ферментных растворах восстановителей (тиолов, ас-
корбиновой кислоты) защищает ферменты от окисления. ЭДТА, глутатион,
цистеин препятствуют инактивации ферментов под действием ионов тяже-
лых металлов, которые в следовых количествах могут содержаться в дис-
тиллированной воде.
     2. Измерение скорости ферментативной реакции.
     Наиболее существенную часть в методике исследования ферментов
составляет измерение скорости ферментативной реакции. По скорости ре-
акции принято определять количество присутствующего фермента. Ско-
рость реакции характеризуется ферментативной единицей (Е). За Е любо-
го фермента принимается то его количество, которое катализирует пре-
вращение одного микромоля субстрата в минуту при 25 °С в оптимальных
условиях действия фермента. Температура 25 °С является стандартной в
физической химии. Удельная активность выражается в ферментативных
единицах на мг белка. Для того чтобы точно измерить скорость реакции,
нужно проводить определение ферментативной активности в самом начале
реакции, т. е. тогда, когда еще имеется избыток субстрата, минимальное
количество продуктов реакции, и фермент находится в активной форме.
     3. Методы количественного определения ферментативной активно-
сти бывают флуоресцентные, манометрические, поляриметрические, элек-
тродные, вискозиметрические, спектрофотометрические (в настоящее вре-
мя для определения активности ферментов применяются наиболее широко).
Эта группа методов основана на способности многих субстратов и продук-
тов ферментативных реакций поглощать свет в определенных участках
спектра. Положение максимума поглощения определяется наличием в хи-
мическом соединении определенных групп, например, линейных или цик-
лических систем с сопряженными двойными связями. Спектрофотометри-


                                  5