Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 7 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

7
Активность фермента рассчитать по формуле:
общ
вн
ΔE ε V
E= ,
tV
⋅
⋅
⋅
где Е – общая активность фермента, мкмоль/мин;
∆Е – скорость ферментативной реакции;
ε – коэффициент экстинкции (для МДГ равен 0.482);
t – время измерения скорости ферментативной реакции, мин;
V
общ
– общий объем вытяжки, мл;
V
вн
– объем внесения пробы в кювету, мл.
Работа 2. Разрушение клеток и экстракция
В природе ферменты находятся в виде смесей и комплексов с разно-
образными веществами, в том числе с белками. В большинстве случаев
примеси других веществ мешают глубокому изучению исследуемого фер-
мента, оказывая на ферментативную активность косвенное влияние путем
воздействия на фермент, субстрат или продукты реакции.
Существуют различные методы экстракции (гомогенизаторы, хими-
ческие, энзиматические, биологические). Животные ткани различаются по
своей прочности: легко разрушаются эритроциты, а в кровеносных сосудах,
напротив, содержится жесткий коллагеносодержащий материал. Успеш-
ным является замораживание ткани в жидком азоте и измельчение ее в за-
мороженном состоянии. Ряд белков можно извлечь из тканей после обра-
ботки их ацетоном или другими органическими растворителями. Расти-
тельные клетки труднее разрушаются
, так как содержат целлюлозную обо-
лочку. Некоторые бактерии легко разрушаются под действием осмотиче-
ского шока, а более устойчивые с толстой клеточной стенкой требуют ме-
ханического воздействия, например, ультразвуком.
Таким образом, способы разрушения клеток можно разделить на сле-
дующие группы:
1.
Мягкое воздействие, которое включает лизис клеток с помощью
осмотического шока, разрушение под действием ферментов (лизоцима и
др.), химическую солюбилизацию (например, экстракция дрожжей толуо-
лом, при которой частично растворяется клеточная стенка), гомогениза-
цию вручную (клетки продавливают через зазор). 
    Активность фермента рассчитать по формуле:
                             ΔE ⋅ ε ⋅ Vобщ
                        E =                ,
                                t ⋅ Vвн
где Е – общая активность фермента, мкмоль/мин;
    ∆Е – скорость ферментативной реакции;
    ε – коэффициент экстинкции (для МДГ равен 0.482);
    t – время измерения скорости ферментативной реакции, мин;
    Vобщ – общий объем вытяжки, мл;
    Vвн – объем внесения пробы в кювету, мл.

                Работа 2. Разрушение клеток и экстракция

     В природе ферменты находятся в виде смесей и комплексов с разно-
образными веществами, в том числе с белками. В большинстве случаев
примеси других веществ мешают глубокому изучению исследуемого фер-
мента, оказывая на ферментативную активность косвенное влияние путем
воздействия на фермент, субстрат или продукты реакции.
     Существуют различные методы экстракции (гомогенизаторы, хими-
ческие, энзиматические, биологические). Животные ткани различаются по
своей прочности: легко разрушаются эритроциты, а в кровеносных сосудах,
напротив, содержится жесткий коллагеносодержащий материал. Успеш-
ным является замораживание ткани в жидком азоте и измельчение ее в за-
мороженном состоянии. Ряд белков можно извлечь из тканей после обра-
ботки их ацетоном или другими органическими растворителями. Расти-
тельные клетки труднее разрушаются, так как содержат целлюлозную обо-
лочку. Некоторые бактерии легко разрушаются под действием осмотиче-
ского шока, а более устойчивые с толстой клеточной стенкой требуют ме-
ханического воздействия, например, ультразвуком.
     Таким образом, способы разрушения клеток можно разделить на сле-
дующие группы:
     1. Мягкое воздействие, которое включает лизис клеток с помощью
осмотического шока, разрушение под действием ферментов (лизоцима и
др.), химическую солюбилизацию (например, экстракция дрожжей толуо-
лом, при которой частично растворяется клеточная стенка), гомогениза-
цию вручную (клетки продавливают через зазор).


                                  7

Страницы