Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 9 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

9
рушения бактериальных клеток. Однако в данном случае необходимо по-
добрать режим ультразвуковой обработки, не вызывающий инактивации
фермента. Разрушение клеток ультразвуком происходит в результате мик-
роколебаний суспензии, помещенной в стеклянный стакан с излучателем
ультразвуковых волн. Ультразвук создает высокую степень вибрации сус-
пензии, вследствие чего происходит механический разрыв клеток. Следует
контролировать уровень пенообразования
и перемешивать при обработке,
поскольку интенсивное пенообразование вызывает денатурацию белков в
образующихся тонких пленках на разделе фаз жидкость/газ. Для разруше-
ния бактерий чаще всего используют излучатель на 22 кГц. При выбран-
ном значении облучают суспензию клеток (1 г сырой биомассы и 5 мл сре-
ды разрушения) последовательно 6–10 раз с интервалами в 30 с
при про-
межуточном охлаждении излучателя и суспензии в воде со льдом. Полу-
ченные клетки затем осаждают на скоростной центрифуге (примерно
20 тыс. g в течение 10–15 мин при 4
о
С).
Работа 3. Фракционирование солями
Метод фракционирования солями очень широко используется при
очистке ферментов. Различные белки выпадают в осадок при разной кон-
центрации соли в растворе. Постепенно повышая концентрацию, можно
получить ряд отдельных фракций с преимущественным содержанием вы-
деляемого фермента в одной из них. Растворение белков в воде связано с
гидратацией каждой молекулы, что приводит к
образованию вокруг белко-
вой глобулы водных (гидратных) оболочек, состоящих из ориентирован-
ных в определенной форме в пространстве молекул воды. Растворы белков
отличаются крайней неустойчивостью, и под действием разнообразных
факторов, нарушающих гидратацию, белки легко выпадают в осадок.
Наиболее часто для фракционирования белковых смесей употребляют
сульфат аммония. Он хорошо растворим в воде,
что позволяет получать
четкое разделение белковых фракций. Растворимость его мало зависит от
температуры, и он, как правило, не оказывает вредного воздействия на
ферменты.
Сульфат аммония добавляют к ферментному раствору отдельными
порциями, при перемешивании. Тщательное перемешивание и дробное до-
рушения бактериальных клеток. Однако в данном случае необходимо по-
добрать режим ультразвуковой обработки, не вызывающий инактивации
фермента. Разрушение клеток ультразвуком происходит в результате мик-
роколебаний суспензии, помещенной в стеклянный стакан с излучателем
ультразвуковых волн. Ультразвук создает высокую степень вибрации сус-
пензии, вследствие чего происходит механический разрыв клеток. Следует
контролировать уровень пенообразования и перемешивать при обработке,
поскольку интенсивное пенообразование вызывает денатурацию белков в
образующихся тонких пленках на разделе фаз жидкость/газ. Для разруше-
ния бактерий чаще всего используют излучатель на 22 кГц. При выбран-
ном значении облучают суспензию клеток (1 г сырой биомассы и 5 мл сре-
ды разрушения) последовательно 6–10 раз с интервалами в 30 с при про-
межуточном охлаждении излучателя и суспензии в воде со льдом. Полу-
ченные клетки затем осаждают на скоростной центрифуге (примерно
20 тыс. g в течение 10–15 мин при 4 оС).

                  Работа 3. Фракционирование солями

    Метод фракционирования солями очень широко используется при
очистке ферментов. Различные белки выпадают в осадок при разной кон-
центрации соли в растворе. Постепенно повышая концентрацию, можно
получить ряд отдельных фракций с преимущественным содержанием вы-
деляемого фермента в одной из них. Растворение белков в воде связано с
гидратацией каждой молекулы, что приводит к образованию вокруг белко-
вой глобулы водных (гидратных) оболочек, состоящих из ориентирован-
ных в определенной форме в пространстве молекул воды. Растворы белков
отличаются крайней неустойчивостью, и под действием разнообразных
факторов, нарушающих гидратацию, белки легко выпадают в осадок.
    Наиболее часто для фракционирования белковых смесей употребляют
сульфат аммония. Он хорошо растворим в воде, что позволяет получать
четкое разделение белковых фракций. Растворимость его мало зависит от
температуры, и он, как правило, не оказывает вредного воздействия на
ферменты.
    Сульфат аммония добавляют к ферментному раствору отдельными
порциями, при перемешивании. Тщательное перемешивание и дробное до-


                                  9

Страницы