Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 10 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

10
бавление предотвращает местное повышение концентрации соли выше
требуемой, что могло бы привести к загрязнению выделяемой фракции.
На величину высаливания белков оказывают влияние не только при-
рода и концентрация соли, но и рН среды и температура.
При проведении высаливания концентрацию сульфата аммония выра-
жают не в абсолютных величинах, а в «процентах насыщения
» или «долях
от полного насыщения». При этом за 100 % (или за 1.0) принимают макси-
мально возможную (насыщающую) концентрацию сульфата аммония при
комнатной температуре. Для достижения 100 % насыщения при комнатной
температуре на каждый литр раствора необходимо прибавить 760 г суль-
фата аммония. Исходя из этого соотношения, рассчитывают количество
соли, которое необходимо прибавить к определенному объему
раствора
белка, чтобы достичь определенной степени насыщения. Труднее произве-
сти соответствующие расчеты при дробном высаливании, когда необходи-
мо прибавлять сульфат аммония к раствору, уже содержащему некоторое
количество соли. В таких случаях используют для расчетов специальную
таблицу (см. приложение 1), горизонтальные строки которой соответству-
ют определенной степени насыщения исходных растворов, а вертикальные
столбцы
– той степени насыщения, которую необходимо достичь на дан-
ной стадии высаливания.
Оборудование и реактивы.
Магнитная мешалка, центрифуга, супернатант.
Ход работы.
Для очистки МДГ из бесклеточного экстракта объемом 5 мл высали-
вать фракцию насыщения 35–80 %.
I стадия: 35 % (NH
4
)
2
SO
4
(см. приложение 1);
19.7 г (NH
4
)
2
SO
4
– 100 мл исходного раствора (супернатант)
х г – 5 мл.
Таким образом взвесить 0.985 г (NH
4
)
2
SO
4
и прибавлять к раствору
постепенно, небольшими порциями, при обязательном перемешивании.
В ходе высаливания следить за изменениями рН; в случае подкисления
провести нейтрализацию разбавленным раствором NH
4
OH. Каждую по-
следующую порцию прибавляют после полного растворения предыдущей.
Соблюдение этих приемов имеет важное значение, поскольку при местном
повышении концентрации соли на данной стадии могут выпасть в осадок
белки, высаливаемые при более высокой ионной силе. После растворения 
бавление предотвращает местное повышение концентрации соли выше
требуемой, что могло бы привести к загрязнению выделяемой фракции.
    На величину высаливания белков оказывают влияние не только при-
рода и концентрация соли, но и рН среды и температура.
    При проведении высаливания концентрацию сульфата аммония выра-
жают не в абсолютных величинах, а в «процентах насыщения» или «долях
от полного насыщения». При этом за 100 % (или за 1.0) принимают макси-
мально возможную (насыщающую) концентрацию сульфата аммония при
комнатной температуре. Для достижения 100 % насыщения при комнатной
температуре на каждый литр раствора необходимо прибавить 760 г суль-
фата аммония. Исходя из этого соотношения, рассчитывают количество
соли, которое необходимо прибавить к определенному объему раствора
белка, чтобы достичь определенной степени насыщения. Труднее произве-
сти соответствующие расчеты при дробном высаливании, когда необходи-
мо прибавлять сульфат аммония к раствору, уже содержащему некоторое
количество соли. В таких случаях используют для расчетов специальную
таблицу (см. приложение 1), горизонтальные строки которой соответству-
ют определенной степени насыщения исходных растворов, а вертикальные
столбцы – той степени насыщения, которую необходимо достичь на дан-
ной стадии высаливания.
     Оборудование и реактивы.
     Магнитная мешалка, центрифуга, супернатант.
     Ход работы.
     Для очистки МДГ из бесклеточного экстракта объемом 5 мл высали-
вать фракцию насыщения 35–80 %.
     I стадия: 35 % (NH4)2SO4 (см. приложение 1);
     19.7 г (NH4)2SO4 – 100 мл исходного раствора (супернатант)
     х г – 5 мл.
     Таким образом взвесить 0.985 г (NH4)2SO4 и прибавлять к раствору
постепенно, небольшими порциями, при обязательном перемешивании.
В ходе высаливания следить за изменениями рН; в случае подкисления
провести нейтрализацию разбавленным раствором NH4OH. Каждую по-
следующую порцию прибавляют после полного растворения предыдущей.
Соблюдение этих приемов имеет важное значение, поскольку при местном
повышении концентрации соли на данной стадии могут выпасть в осадок
белки, высаливаемые при более высокой ионной силе. После растворения
                                  10

Страницы