Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 12 стр.

фером до тех пор, пока кислотность вытекающей из колонки жидкости не
станет постоянной (рН 7.5).
      Ход работы.
      Для освобождения от низкомолекулярных примесей, ферментную
вытяжку пропустить через колонку (1,5×10 см) с сефадексом G-25. Объем
наносимого образца не должен превышать 4 мл. После нанесения пробы
колонку заполнить буферным раствором и начать элюирование трис-HCl
буфером, рН 7.5. При этом белковый раствор освобождается от низкомо-
лекулярных примесей, пигментов, и происходит смена буфера, если для
экстракции белков использовался иной буфер. Элюат собирать фракциями
по 2 мл, измерить активность фермента, продолжить очистку наиболее ак-
тивной фракции. По окончании фракционирования колонку промыть во-
дой, трис-HCl буфером до постоянного значения рН и вновь использовать
для очистки.



     Работа 5. Применение ДЭАЭ-целлюлозы для разделения белков

     В основе ионообменной хроматографии лежат реакции ионного обме-
на между белками и различными ионообменниками. Ионообменные смолы
являются полимерными органическими соединениями, содержащими
функциональные группы, способные вовлекаться в ионный обмен. Разли-
чают положительно заряженные анионообменники, представленные орга-
ническими основаниями и аминами, и отрицательно заряженные катионо-
обменники, содержащие фенольные, сульфо- или карбоксильные группы
(см. приложение 3).




    ДЭAЭ-целлюлоза                     КМ-целлюлоза


                                  12