Биотехнология. Коростелева Н.И - 34 стр.

       4.2. Ââåäåíèå ãåíà â âåêòîð è êëîíèðîâàíèå

     Очень важной операцией в генной инженерии является вве-
дение в клетку и стабильное поддержание генетической инфор-
мации, содержащейся в рекомбинантных молекулах ДНК. ДНК,
введенная в бактериальную клетку, гидролизуется ее фермента-
ми до нуклеотидов. Если даже ДНК «выживает» в клетке, то она
утрачивается в процессе деления. Для того, чтобы рекомбинант-
ная ДНК стала составной частью генома клетки, она должна ли-
бо интегрироваться в хромосому и реплицироваться за ее счет,
либо быть способной к автономной репликации. Это достигает-
ся при помощи векторных молекул (векторов). Рекомбинантные
ДНК привносят в организм реципиента новые свойства: синтез
аминокислот и белков, гормонов, ферментов, витаминов и др.
     Вектор – молекула ДНК, способная переносить в клетку
чужеродную ДНК и обеспечивать там ее размножение (клони-
рование) или реже – включение в геном. К векторам предъявля-
ются определенные требования. Кольцевая молекула ДНК мо-
жет реплицироваться в клетках, если содержит ДНК-репликатор
(оri-последовательность). Вектор должен содержать уникальные
сайты рестрикации для нескольких рестриктаз, обладать опре-
деленной емкостью и не выбрасывать встроенный фрагмент;
маркерный ген, облегчающий отбор клеток, несущих вектор,
чтобы ген экспрессировался (получался продукт, синтезирован-
ный по информации введенного гена); специфические для дан-
ной клетки промоторы и терминаторы («стоп»-кодоны) транс-
крипции.
     В свою очередь, РНК-транскрипт будет транслироваться, ес-
ли РНК содержат сигналы связывания с рибосомами и кодоны
инициации и терминации трансляции (рис. 7).
     Встраивание чужеродного фрагмента ДНК в геном вектора
осуществляется в два этапа: сначала ДНК вектора разрезается с
помощью рестриктазы, а затем в них встраивается чужеродный
фрагмент.



                             34