Биотехнология. Коростелева Н.И - 36 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

АГАУ | Барнаул

Составители: 

Рубрика: 

36
кие векторы содержат специфические последовательности, спо-
собствующие интеграции в геном.
Современные векторные системы часто бывают полифунк-
циональными, совмещая несколько функций в одном векторе.
Большинство из них сконструировано при помощи методов ген-
ной инженерии.
В качестве векторов прокариот используют плазмиды, фаги
и их комбинации. Плазмиды – это бактериальные внехромосом-
ные двухцепочечные кольцевые молекулы ДНК с вариабельны-
ми молекулярными массами (1-3% генома бактериальной клет-
ки). Используют плазмиды, способные размножаться автоном-
но, давая до 200 копий, а под действием ингибитора биосинтеза
протеинов (хлорамфеникола) – до нескольких тысяч. Использу-
ют коньюгативные плазмиды (F) и неконьюгативные (R, Col, D).
R-плазмиды содержат гены устойчивости к антибиотикам,
Col-плазмиды обеспечивают синтез разных колицинов – высо-
коспецифических антибиотиков, подавляющих жизнедеятель-
ность других штаммов и видов бактерий, Д-плазмиды вызывают
биодеградацию. Бактериальная клетка обычно может содержать
в своем составе плазмиды только одного типа. Встраивание чу-
жеродной ДНК в векторную плазмиду – довольно редкое собы-
тие. Только одна из 10-30 полученных после легирования моле-
кул будет рекомбинантной, т.е. нести в своем составе чужерод-
ный фрагмент. Такие клетки отбирают на селективной среде с
антибиотиками.
Плазмидные векторы имеют небольшую емкость, в них
можно клонировать фрагменты длиной не более 7-8 тысяч нук-
леотидных пар (т.н.п.), т.е. они пригодны только для клонирова-
ния генов прокариот. В генетической инженерии часто исполь-
зуют плазмиду рВR 322, которая содержит репликатор колици-
ногенной плазмиды Col Е1, ген устойчивости к антибиотикам –
ампициллину (Amp') и тетрациклину (Тс').
Плазмидные векторы используются чаще всего для размно-
жения (клонирования) гена. В настоящее время клонирование
генов успешно осуществляется при помощи полимеразой цеп-
ной реакции (ПЦР) в специальных автоматах. Фрагмент ДНК
(ген) помещают в прибор, добавляют праймеры (олигонуклео-
тиды, комплементарные концам фрагмента ДНК), нуклеотиды,
ДНК-полимеразу. Раствор нагревают до 95
0
С, вызывая денату-
кие векторы содержат специфические последовательности, спо-
собствующие интеграции в геном.
    Современные векторные системы часто бывают полифунк-
циональными, совмещая несколько функций в одном векторе.
Большинство из них сконструировано при помощи методов ген-
ной инженерии.
    В качестве векторов прокариот используют плазмиды, фаги
и их комбинации. Плазмиды – это бактериальные внехромосом-
ные двухцепочечные кольцевые молекулы ДНК с вариабельны-
ми молекулярными массами (1-3% генома бактериальной клет-
ки). Используют плазмиды, способные размножаться автоном-
но, давая до 200 копий, а под действием ингибитора биосинтеза
протеинов (хлорамфеникола) – до нескольких тысяч. Использу-
ют коньюгативные плазмиды (F) и неконьюгативные (R, Col, D).
R-плазмиды содержат гены устойчивости к антибиотикам,
Col-плазмиды обеспечивают синтез разных колицинов – высо-
коспецифических антибиотиков, подавляющих жизнедеятель-
ность других штаммов и видов бактерий, Д-плазмиды вызывают
биодеградацию. Бактериальная клетка обычно может содержать
в своем составе плазмиды только одного типа. Встраивание чу-
жеродной ДНК в векторную плазмиду – довольно редкое собы-
тие. Только одна из 10-30 полученных после легирования моле-
кул будет рекомбинантной, т.е. нести в своем составе чужерод-
ный фрагмент. Такие клетки отбирают на селективной среде с
антибиотиками.
    Плазмидные векторы имеют небольшую емкость, в них
можно клонировать фрагменты длиной не более 7-8 тысяч нук-
леотидных пар (т.н.п.), т.е. они пригодны только для клонирова-
ния генов прокариот. В генетической инженерии часто исполь-
зуют плазмиду рВR 322, которая содержит репликатор колици-
ногенной плазмиды Col Е1, ген устойчивости к антибиотикам –
ампициллину (Amp') и тетрациклину (Тс').
    Плазмидные векторы используются чаще всего для размно-
жения (клонирования) гена. В настоящее время клонирование
генов успешно осуществляется при помощи полимеразой цеп-
ной реакции (ПЦР) в специальных автоматах. Фрагмент ДНК
(ген) помещают в прибор, добавляют праймеры (олигонуклео-
тиды, комплементарные концам фрагмента ДНК), нуклеотиды,
ДНК-полимеразу. Раствор нагревают до 950С, вызывая денату-

                              36

Страницы