Биотехнология. Коростелева Н.И - 37 стр.

рацию ДНК. Затем смесь охлаждают до 50-650С, и праймеры
прикрепляются к концам каждой свободной нити ДНК. Снова
повышают температуру до 720С, и ДНК-полимераза начинает
присоединять нуклеотиды к праймерам и строить копии цепочки
ДНК. Изменяя температуру, повторяют цикл и копируют ДНК
десятки и сотни раз. После 20 циклов счет идет на миллионы.
    Для прокариот сконструированы векторы на основе фага
λ, в которые можно включать фрагменты чужеродной ДНК до
22 т.н.п. Из генома фага вырезают его собственную ДНК, остав-
ляя концевые фрагменты фага неизменными, так как они необ-
ходимы для репликации и упаковки ДНК в головку фага (cos-
сайты).
    Для клонирования и переноса более крупных фрагментов
ДНК (30-45 т.н.п.) были сконструированы искусственные векто-
ры – космиды, содержащие cos-участок генома фага, за счет че-
го они могут упаковываться в голову фага λ и специальные по-
следовательности (ori-сайт), позволяющие им реплицироваться
по плазмидному типу.
    Космидами трансформируют клетки E. coli, где они размно-
жаются как плазмиды, и каждая фаговая частица вызывает обра-
зование колонии индивидуального бактериального трансфор-
манта.
    Клонирование фрагментов ДНК от 100 т.н.п. и более осуще-
ствляют в специально сконструированных векторах ВАС и
VAC. ВАС-векторы получены на основе F-плазмид бактерий и
содержат гены, ответственные за репликацию и копийность этих
плазмид в бактериальных клетках. Емкость ВАС-векторов со-
ставляет 100-300 т.н.п.
    VAC-векторы представляют собой искусственную дрожже-
вую минихромосому, содержат центромеру, теломеру и точку
начала репликации. В такой вектор можно встроить фрагмент
чужеродной ДНК более 100 т.н.п., и такая минихромосома, вве-
денная в клетки дрожжей, будет реплицироваться и вести себя
аналогично другим дрожжевым хромосомам при митозе.
    Эукариотические вирусы нашли более скромное применение
в качестве векторов.
    Практически используется только онкогенный вирус SV-40 и
его производные. Все эти векторы – дефектные вирусы, не спо-
собные дать полноценные вирусные частицы в клетке хозяина.

                             37