Биотехнология. Коростелева Н.И - 39 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

АГАУ | Барнаул

Составители: 

Рубрика: 

39
(10
6
молекул на зараженную клетку), малым размером, сильны-
ми промоторами. Однако фитовирусы имеют ряд недостатков:
небольшую емкость, патогенность и неспособность встраивать-
ся в хромосомы хозяина. Иногда геном ВМЦК встраивают в
Т-область Ti-плазмиды и в ее составе интегрируют в ядерный
геном различных растений, при этом из состава фитовируса вы-
резаются области, обеспечивающие его вирулентность.
В генной инженерии широко используются геномные биб-
лиотеки и библиотеки к-ДНК. Геномная библиотека представля-
ет собой клонированный в составе векторов полный набор по-
следовательностей ДНК какого-либо организма. Полученные
при помощи рестриктаз фрагменты ДНК лигируют с плечами
фага и упаковывают в уже готовые головки фаговых частиц.
Хранят фаговый банк под хлороформом при -70
0
С. Библиотекой
к-ДНК называют совокупность векторных плазмид, каждая из
которых несет в своем составе к-ДНК. Молекулы к-ДНК, сши-
тые с векторными молекулами, трансформируют в бактериаль-
ные клетки: каждая бактерия получает только одну рекомби-
нантную плазмиду.
Для поиска нужного гена из клонотеки используют индиви-
дуальную радиоактивно меченную и-РНК или синтетические
меченые олигонуклеотиды (не менее 30 н.п.), полностью ком-
плементарные участку искомого гена.
4.3. Ìåòîäû òðàíñôîðìàöèè
æèâîòíûõ è ðàñòèòåëüíûõ êëåòîê
Векторные плазмиды и векторные вирусы со встроенными
чужеродными генами называют гибридными (или химерными).
После конструирования рекомбинантных ДНК их с помощью
трансформации вводят в реципиентный организм: бактериаль-
ную, грибную, растительную или животную клетку. При этом
производится предварительная обработка клеток соединениями,
способствующими проникновению ДНК внутрь клеток с после-
дующим помещением их на селективную среду, в которой спо-
собны существовать только клетки, получившие векторную мо-
лекулу, например, в среду с определенным антибиотиком.
Процесс инфицирования клеток с помощью чужеродных
ДНК, приводящий к образованию зрелого фагового потомства,
называется трансфекцией. 
(106 молекул на зараженную клетку), малым размером, сильны-
ми промоторами. Однако фитовирусы имеют ряд недостатков:
небольшую емкость, патогенность и неспособность встраивать-
ся в хромосомы хозяина. Иногда геном ВМЦК встраивают в
Т-область Ti-плазмиды и в ее составе интегрируют в ядерный
геном различных растений, при этом из состава фитовируса вы-
резаются области, обеспечивающие его вирулентность.
    В генной инженерии широко используются геномные биб-
лиотеки и библиотеки к-ДНК. Геномная библиотека представля-
ет собой клонированный в составе векторов полный набор по-
следовательностей ДНК какого-либо организма. Полученные
при помощи рестриктаз фрагменты ДНК лигируют с плечами
фага и упаковывают в уже готовые головки фаговых частиц.
Хранят фаговый банк под хлороформом при -700С. Библиотекой
к-ДНК называют совокупность векторных плазмид, каждая из
которых несет в своем составе к-ДНК. Молекулы к-ДНК, сши-
тые с векторными молекулами, трансформируют в бактериаль-
ные клетки: каждая бактерия получает только одну рекомби-
нантную плазмиду.
    Для поиска нужного гена из клонотеки используют индиви-
дуальную радиоактивно меченную и-РНК или синтетические
меченые олигонуклеотиды (не менее 30 н.п.), полностью ком-
плементарные участку искомого гена.
             4.3. Ìåòîäû òðàíñôîðìàöèè
           æèâîòíûõ è ðàñòèòåëüíûõ êëåòîê
   Векторные плазмиды и векторные вирусы со встроенными
чужеродными генами называют гибридными (или химерными).
После конструирования рекомбинантных ДНК их с помощью
трансформации вводят в реципиентный организм: бактериаль-
ную, грибную, растительную или животную клетку. При этом
производится предварительная обработка клеток соединениями,
способствующими проникновению ДНК внутрь клеток с после-
дующим помещением их на селективную среду, в которой спо-
собны существовать только клетки, получившие векторную мо-
лекулу, например, в среду с определенным антибиотиком.
   Процесс инфицирования клеток с помощью чужеродных
ДНК, приводящий к образованию зрелого фагового потомства,
называется трансфекцией.

                            39

Страницы