Биотехнология. Коростелева Н.И - 41 стр.

    Метод электропорации основан на воздействии на клетки
(протопласты) высоковольтным импульсом (200-350 В, дли-
тельность 54 мс), увеличивающим проницаемость биомембран.
Молекулы ДНК поглощаются клетками через поры в клеточной
мембране. После разведения раствора протопласты высеиваются
на соответствующую среду для регенерации. Эффективность
переноса определяется через 24-48 ч после электрошока.
    Упаковка в липосомы используется для защиты экзогенного
генетического материала, который вводится в протопласты рас-
тений, от нуклеаз. Липосомы – сферические образования, обо-
лочка которых состоит из фосфолипидов. Их можно получить
путем резкого встряхивания или обработки ультразвуком вод-
ных эмульсий фосфолипидов. Недостатком метода является его
низкая трансформирующая активность (0,5-1%).
    Метод биобаллистической трансформации является одним
из наиболее эффективных методов трансформации однодольных
растений, хотя может быть применим и для двудольных.
    На мельчайшие частички вольфрама, платины или золота
диаметром 0,6-1,2 мкм напыляется ДНК-вектор. Эти частицы по-
мещаются внутрь биобаллистической пушки, а под нее (на рас-
стоянии 10-15 см) ставится в чашке Петри каллус или суспензия
клеток с агаризированной средой. В пушке вакуумным насосом
уменьшается давление до 0,1 атм. В момент сбрасывания давле-
ния вольфрамовые или золотые частички с огромной скоростью
выбрасываются из пушки и, разрывая клеточные стенки, входят в
цитоплазму и ядро клеток. Центральные клетки, как правило, по-
гибают, а находящиеся от центра на расстоянии 0,6-1 см – будут
трансформированными. Их осторожно переносят на среду для
дальнейшего культивирования и регенерации.
    В соматические клетки животных ДНК вводится путем мик-
роинъекции в ядро. Культуры клеток млекопитающих могут
быть эффективным источником выделения ряда вирусных анти-
генов с целью получения вакцин для животных и человека.
    В настоящее время разработаны способы введения генов в
эмбриональные клетки млекопитающих, мух и некоторых рас-
тений с целью изменения таких свойств организма, как скорость
роста, устойчивость к заболеваниям и внешним воздействиям.

                             41