Биотехнология. Коростелева Н.И - 42 стр.

Микроинъекцию клонированных генов проводят в один или оба
пронуклеуса только что оплодотворенной яйцеклетки. Затем
яйцеклетку немедленно имплантируют в яйцевод приемной ма-
тери или дают возможность развиваться в культуре до стадии
бластоцисты, после чего имплантируют в матку. Таким обра-
зом были инъецированы гены интерферона и инсулина челове-
ка, ген глобина кролика, ген тимидинкиназного вируса герпеса
и к-ДНК вируса лейкемии мышей. Выживает обычно от 10 до
30% яйцеклеток, а доля мышей, родившихся из трансформиро-
ванных яйцеклеток, составляет до 40%. Уровень экспрессии чу-
жеродного гена зависит от места интеграции ДНК с хромосома-
ми, от дифференцировки тканей.

                         4.4. Ñêðèíèíã

    Скрининг – отбор бактерий или клеток, в которые встроился ген.
    В состав векторов обычно входит кроме функционального
гена и ген селективного маркера. У растений это обычно ген,
кодирующий устойчивость к антибиотикам (канамицину или
гигромицину), а также гербициду хлорсульфарону или фосфи-
нотрицину; у животных ген устойчивости к ампициллину или
тетрациклину.
    Первичную селекцию трансгенных растений, бактерий про-
водят на среде с соответствующим антибиотиком. На такой сре-
де регенерируют растения и дают колонии бактерии, в геноме
которых присутствует ген селективного маркера. Однако выжи-
вание на селективной среде не может быть абсолютным доказа-
тельством трансгенной природы бактерии или растения. Реком-
бинантные клоны могут быть идентифицированы и по синтези-
руемому ими продукту. Для полного доказательства присутст-
вия в геноме растений последовательности т-ДНК проводят
анализ с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и моле-
кулярного анализа, основанного на блотгибридизации хромо-
сомной ДНК трансгенного растения с использованием в качест-
ве радиоактивного зонда фрагменты т-ДНК. Кроме того, прово-
дят дополнительный анализ экспрессии функционального гена
методом выявления соответствующей и-РНК или белка.

                               42