Биотехнология. Коростелева Н.И - 35 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

АГАУ | Барнаул

Составители: 

Рубрика: 

35
ДНК Т Т Г А Ц А Т А Т А А Т Ц А Т Г А Г Г А Т Г Ц Т А Ц А Ц
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
А А Ц Т Г Т
А Т А Т Т А Г Т А Ц Т Ц Ц Т А Ц Г А Т Г Т Г
Р Р Т структурный ген
и-РНК ГАГГ
АУГЦУАЦАЦ
R мет-лей-гис
белок аминокислоты полипептидной цепи
Рис. 7. Экспрессия гена у прокариот:
Р – промоторы; Т – сайт инициации транскрипции;
R – сайт связывания рибосом
Сшивание генов (фрагментов) ДНК по «липким» концам,
т.е. взаимокомплементарным участкам длиной из 4-6 нуклеоти-
дов, достаточно легко осуществляется ферментом ДНК-лигазой
(лигирование ДНК) с образованием ковалентной фосфодиэфир-
ной связи между соседними нуклеотидами:
- - А Т Г Ц А А Т Т Ц А Г Т Ц _ _ _
Т А Ц Г А А Т Т Г Т Ц А Г _ _ _
сшивание ↓ ДНК-лигазой
А Т Г Ц А А Т Т – Ц А Г Т Ц
Т А Ц Г Т Т А А – Г Т Ц А Г
При отсутствии комплементарных «липких» концов у сши-
ваемых фрагментов их достраивают при помощи линкеров (или
переходников).
В качестве векторов используют, как правило, плазмиды,
бактериофаги, мобильные элементы, вирусы животных. В на-
стоящее время создано большое число векторов, и по профилю
использования их можно подразделить на несколько типов.
1. Векторы для клонирования фрагмента ДНК. Для этого
используются чаще бактериальные плазмиды и фаги.
2. Экспрессионные векторы. Их используют для анализа
конкретных последовательностей генов и их белковых продук-
тов, а также наработок конкретного белка. Экспрессионные век-
торы для эукариотических организмов всегда содержат так на-
зываемую экспрессионную кассету, состоящую из промотора,
способного работать в данном организме, и сайта полиаденили-
рования.
3. Векторы для трансформации. Используются для введения
чужеродного фрагмента ДНК в геном реципиента. Обычно та-
ДНК Т Т Г А Ц А Т А Т А А Т Ц А Т   ГАГГ АТГЦТАЦАЦ
      | | | | | | | | | | | | | | |  | | | | | | | | | | | | |
     ААЦТГТ АТАТТА ГТА              ЦТЦЦ ТАЦГАТГТГ
           Р            Р       Т             структурный ген
и-РНК                                ГАГГ        АУГЦУАЦАЦ
                                       R          мет-лей-гис
белок                          аминокислоты полипептидной цепи

               Рис. 7. Экспрессия гена у прокариот:
        Р – промоторы; Т – сайт инициации транскрипции;
                  R – сайт связывания рибосом

     Сшивание генов (фрагментов) ДНК по «липким» концам,
т.е. взаимокомплементарным участкам длиной из 4-6 нуклеоти-
дов, достаточно легко осуществляется ферментом ДНК-лигазой
(лигирование ДНК) с образованием ковалентной фосфодиэфир-
ной связи между соседними нуклеотидами:
     --АТГЦААТТ                     ЦАГТЦ ___
        ТАЦГ                        ААТТГТЦАГ ___
                 сшивание ↓ ДНК-лигазой
                 АТГЦААТТ –ЦАГТЦ
                 ТАЦГТТАА– ГТЦА Г
     При отсутствии комплементарных «липких» концов у сши-
ваемых фрагментов их достраивают при помощи линкеров (или
переходников).
     В качестве векторов используют, как правило, плазмиды,
бактериофаги, мобильные элементы, вирусы животных. В на-
стоящее время создано большое число векторов, и по профилю
использования их можно подразделить на несколько типов.
     1. Векторы для клонирования фрагмента ДНК. Для этого
используются чаще бактериальные плазмиды и фаги.
     2. Экспрессионные векторы. Их используют для анализа
конкретных последовательностей генов и их белковых продук-
тов, а также наработок конкретного белка. Экспрессионные век-
торы для эукариотических организмов всегда содержат так на-
зываемую экспрессионную кассету, состоящую из промотора,
способного работать в данном организме, и сайта полиаденили-
рования.
     3. Векторы для трансформации. Используются для введения
чужеродного фрагмента ДНК в геном реципиента. Обычно та-

                              35

Страницы