Спектрофотометрическое определение аминокислот в водных растворах. Котова Д.Л - 31 стр.

                                           31
и зменяя рН сред ы , ли бо д обавляя к ней те и ли и ны е осад и тели белков.
Хорош и ерез у льтаты полу чаю т при э кстракци и свобод ны х ами ноки слот и з
би ологи чески х объектов 5%-ны м вод ны м раствором три хлору ксу сной
ки слоты , которая является од ни м и з лу чш и х осад и телей белков. О д нако
нед остаток у казанного метод а состои т в том, что д ляд альнейш ей работы с
ами ноки слотами , сод ержащ и ми ся в такой вы тяжке, необход и мо у д алени е
и з неё три хлору ксу сной ки слоты , пред ставляю щ ее д овольно тру д оёмку ю
операци ю . Д ля и звлечени я свобод ны х ами ноки слот и з би ологи ческого
матери ала при меняю т многи е д ру ги е вещ ества: вод у , под ки сленны й
ацетон, разбавленну ю у ксу сну ю ки слоту и т.д .
      Е сли ами ноки слота наход и тся в связанном состояни и , то вы д ели ть её
можно после ги д роли з а белка: ли бо пу тём нагревани я препарата с
ки слотами (20% - ны й раствор HCL; 30% - ны й раствор H2 SO4) и ли
основани ями (5 М          NaOH; 14% - ны й раствор Ba(OH)2 ), ли бо пу тём
и нку баци и препарата сф ерментами [22].
       Н аи более сложну ю и ответственну ю часть работы по вы д елени ю той
и ли и ной ами ноки слоты и з при род ны х объектов пред ставляет процесс
отд елени я д анной ами ноки слоты от сопу тству ю щ и х ей д ру ги х
ами ноки слот вы тяжки и ли ги д роли зата. Ранее при менявш и еся метод ы
ф ракци они ровани я ами ноки слот (разгонка в ваку у ме э ти ловы х э ф и ров
ами ноки слот, осажд ени е ами ноки слот в ви д е мед ны х, серебрянны х и д р.
солей, и з би рательное растворени е некоторы х ами ноки слот в органи чески х
раствори телях) сейчас почти полностью                   заменены   просты м и
э ф ф екти вны м хроматограф и чески м метод ом раз д елени я сложны х
ами ноки слотны х смесей на и нд и ви д у альны есоставляю щ и е.
      П ри вы д елени и свобод ны х ами ноки слот и з би ологи ческого матери ала
и спольз у ю тся вы су ш енны е насекомы е, напри мер ку колки ту тового
ш елкопряд а, являю щ и еся отход ами кокономотального прои з вод ства и
сод ержащ и е в несколько раз больш е свобод ны х ами ноки слот, чем д ру ги е
объекты при род ного прои схожд ени я. П ри работе с и ны м матери алом
(ткани жи вотны х, ф и кси рованны е э танолом при нагревани и и
перевед ённы е в су хой порош ок) необход и мо у вели чи ть в 2 – 3 раза
коли чество 1% - ной HCl, и д у щ ей на растворени е су хого остатка перед
хроматограф и ровани ем. А ми ноки слоты             в вы тяжке обнару жи ваю т
реакци ей с ни нги д ри ном (три кетоги д ри нд еном). П роявляется и нтенси вное
си не – ф и олетовое окраш и вани е, сви д етельству ю щ ее о при су тстви и в
и спы ту емой пробеα- ами ноки слот [23].
       К роме того, су щ еству ю т цветны е вы сокоспеци ф и чны е реакци и на
ами ноки слоты , некоторы е и з ни х д аже наход ят при менени е д ля
коли чественного опред елени я ами ноки слот. Н апр и м ер , для опр еделен и я
т и р ози н а и с по льзует с я р еакци я М и ллон а. (К нескольки м кри сталлам
ти рози на (полу ченного и з ш ёлка и ли коммерческого препарата)
при бавляю т 5 мл 2,5%-ного раствора серной ки слоты и перемеш и ваю т д о
полного растворени я). П ри ли ваю т 1 мл реакти ва М и ллона, встряхи ваю т и
оставляю т стоять при комнатной температу ре. Ч ерез некоторое время