Физико-химические основы биолюминесцентного анализа. Кудряшева Н.С - 64 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

127
( 5,4 10
-4
M).
Ход работы
Как и в лабораторной работе N2, предварительно готовят
нужные концентрации реактивов:
1. 0025%-ный водный раствор альдегида;
2. раствор КРАБа в 0.5 мл буфера;
3. 4 10
-4
М раствора NADH.
а) Зависимость интенсивности биолюминесценции бифер-
ментной системы от концентрации FMN.
Варьируем концентрацию FMN, изменяя объем добавляе-
мого раствора FMN от 2 до 200 мкл (8-10 точек).
Состав реакционной смеси:
1. 50 мкл 0.0025%-ного водного раствора альдегида;
2. 5 мкл КРАБа;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0;
4. 200 мкл 4 10
-4
М раствора NADH;
5. 2-200 мкл 5,4 10
-4
M раствора FMN.
Строим зависимость интенсивности биолюминесценции (I)
от концентрации FMN (С) в молях на литр (молярность, М).
б) Зависимость интенсивности биолюминесценции бифер-
ментной системы от концентрации тетрадеканаля.
Варьируем концентрацию тетрадеканаля, изменяя объем
добавляемого раствора альдегида от 2 до 200 мкл (8-10 точек).
128
Состав реакционной смеси:
1. (2-200) мкл 0.0025%-ного водного раствора альдеги-
да(тетрадеканаля);
2. 5 мкл КРАБа
;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0;
4. 200 мкл 4 10
-4
М раствора NADH;
5. 50 мкл 5,4 10
-4
M раствора FMN.
Строим зависимость интенсивности биолюминесценции (I)
от концентрации альдегида (С, М).
в) Зависимость интенсивности биолюминесценции бифер-
ментной системы от концентрации NADH.
Варьируем концентрацию NADH, изменяя объем добав-
ляемого раствора альдегида от 5 до 200 мкл (3-5 точек).
Состав реакционной смеси:
1. 50 мкл 0.0025%-ного водного раствора альдегида;
2. 5 мкл КРАБа;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0,
4. 5-200 мкл 4 10
-4
М раствора NADH;
5. 50 мкл 5,4 10
-4
M раствора FMN.
Приготовить другую концентрацию NADH 4 10
-3
М (1 мл).
Провести измерения, добавляя в реакционную смесь 50, 100 и
200 мкл раствора этой концентрации NADH. Построить зави-
симость интенсивности биолюминесценции (I) от концентра-
ции NADH (С, М).
г) Зависимость интенсивности биолюминесценции бифер-
ментной системы от концентрации фермента.
Варьируем концентрацию фермента, изменяя объем добав-
ляемого раствора фермента от 2 до 50 мкл (6-8 точек).
Состав реакционной смеси:
1. 50
мкл 0.0025%-ного водного раствора альдегида;
2. (2-50) мкл КРАБа;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0;

Страницы