ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
10
срез различных тканей и клеток, может быть тотальным, давленым. Цито-
логические микропрепараты могут быть временными или постоянными.
С помощью микроскопа можно изучать как живые , так и фиксиро-
ванные (мертвые ) клетки .
Для прижизненного (витального) изучения клетки растений , живот-
ных, человека или свободноживущие одноклеточные микроорганизмы ли-
бо помещают прямо в жидкую среду на предметное стекло, либо предва-
рительно культивируют в условиях , благоприятных для их жизнедеятель-
ности и размножения. Например, для культивирования клеток человека
используют лимфоциты (клетки крови), фибробласты кожи (клетки соеди-
нительной ткани), миобласты (молодые одноядерные мышечные клетки ),
эпителиальные клетки и др.
Для изучения неокрашенных клеток используют различные методы
контрастирования: фазово-контрастную , темнопольную , флуоресцентную
микроскопию . Это различные “приемы” с помощью которых невидимые
для глаза оптические эффекты преобразуются в воспринимаемые глазом
изменения. Другая возможность их изучения – использование витальных
красителей, т.е. красителей в большом разведении (1:10 000 – 1:50 000) с
целью снижения их токсичности.
Несмотря на важность и достаточную простоту витальных наблюде-
ний , большая часть сведений о структуре и свойствах клеток получена на
фиксированном материале. Для этого ткань фиксируют (т.е. быстро уби-
вают, помещая в фиксатор), используя различные смеси реагентов: альде-
гиды, спирты и др. с последующим окрашиванием клеток. В зависимости
от целей исследования изготавливают временные (требующие немедленно-
го изучения) или постоянные (хранящиеся длительное время) микропрепа-
раты с последующим их изучением с помощью светового микроскопа.
Рассмотрим принципы изготовления давленых и микротомных пре-
паратов для цитологического изучения растительных клеток.
Для подсчета числа, изучения структуры и морфологии хромосом;
изучения характера деления клетки (митоза, мейза) в норме и при различ-
ных патологиях ; подсчета количества ядрышек и определения их размеров
и др. изготавливают временные или временно-постоянные давленые пре -
параты. Для изучения структуры и расположения клеток в различных ти-
пах тканей, изучения процесса оплодотворения, развития зародыша, эн-
досперма и др. изготавливают постоянные микротомные препараты. В
обоих случаях работу начинают с фиксации выбранного для исследования
материала (корешков проростков, молодых листьев из распускающихся ве -
гетативных почек, генеративных почек и др). Например, деление сомати-
ческих клеток – митоз можно наблюдать в меристемах корней проросших
семян , в конусах нарастания стебля, в меристеме листьев распускающихся
вегетативных почек. Для многих растений митозы идут наиболее активно в
утренние и вечерние часы. Так , у сосны обыкновенной наблюдается два
пика митоза – в 9-11 часов и 20-23 часа. Поэтому при проращивании се-
мян , корешок, достигший 0,5-1,5 см, фиксируют именно в это время.
10 с ре з разл ичных ткане й и кл е ток, може т быть тотал ь ным, давл е ным. Ц ито- л огиче с кие микропре параты могут быть вре менными ил и пос тоянными. С помощ ь ю микрос копа можно изучать как живые , так и фикс иро- ванные (ме ртвые ) кл е тки. Д л я при ж и зн ен н о го (витал ь ного) изуче ния кл е тки рас те ний , живот- ных, че л ове каил и с вободноживущ ие однокл е точные микроорганизмы л и- бо поме щ аю т прямо в жидкую с ре ду напре дме тное с те кл о, л ибо пре два- рите л ь но кул ь тивирую т в ус л овиях, бл агоприятных дл я их жизне де яте л ь - нос ти и размноже ния. Н априме р, дл я кул ь тивирования кл е ток че л ове ка ис пол ь зую т л имфоциты (кл е тки крови), фибробл ас ты кожи (кл е тки с ое ди- ните л ь ной ткани), миобл ас ты (мол одые однояде рные мыш е чные кл е тки), эпите л иал ь ные кл е тки и др. Д л я изуче ния не окраш е нных кл е ток ис пол ь зую т разл ичные ме тоды ко н т ра ст и ро в а н и я: фазово-контрас тную , те мнопол ь ную , фл уоре с це нтную микрос копию . Э то разл ичные “прие мы” с помощ ь ю которых не видимые дл я гл аза оптиче с кие эффе кты пре образую тс я в вос принимае мые гл азом изме не ния. Д ругая возможнос ть их изуче ния – ис пол ь зование в и т а ль н ых кра си т елей, т.е . крас ите л е й в бол ь ш ом разве де нии (1:10 000 – 1:50 000) с це л ь ю с ниже нияих токс ичнос ти. Н е с мотря наважнос ть и дос таточную прос тоту витал ь ных набл ю де - ний , бол ь ш ая час ть с ве де ний о с труктуре и с вой с твах кл е ток пол уче нана фи кси ро в а н н о м мате риал е . Д л я этого ткань фи кси руют (т.е . быс тро уби- ваю т, поме щ ая в фикс атор), ис пол ь зуя разл ичные с мес и ре аге нтов: ал ь де - гиды, с пирты и др. с пос л е дую щ им о кра ш и в а н и ем кл е ток. В завис имос ти от це л е й ис с л е дованияизготавл иваю т времен н ые (тре бую щ ие не ме дл е нно- го изуче ния) ил и по ст о ян н ые (хранящ ие с ядл ите л ь ное вре мя) ми кро препа - ра т ы с пос л е дую щ им их изуче ние м с помощ ь ю с ве тового микрос копа. Р ас с мотрим при н ци пы и зго т о в лен и я да в лен ых и ми кро т о мн ых пре - паратов дл яцитол огиче с кого изуче ниярас тите л ь ных кл е ток. Д л я подс че та чис л а, изуче ния с труктуры и морфол огии хромос ом; изуче ния характе раде л е ния кл е тки (митоза, ме й за) в норме и при разл ич- ных патол огиях; подс че такол иче с тваядрыш е к и опре де л е нияих разме ров и др. изготавл иваю т вре ме нные ил и вре ме нно-пос тоянные да влен ые пре- па ра т ы. Д л я изуче ния с труктуры и рас пол оже ния кл е ток в разл ичных ти- пах ткане й , изуче ния проце с с а опл одотворе ния, развития зародыш а, эн- дос пе рма и др. изготавл иваю т по ст о ян н ые ми кро т о мн ые препа ра т ы. В обоих с л учаях работу начинаю т с фикс ации выбранного дл я ис с л е дования мате риал а(коре ш ков пророс тков, мол одых л ис ть е в из рас пус каю щ ихс яве - ге тативных поче к, ге не ративных поче к и др). Н априме р, де л е ние с омати- че с ких кл е ток – митоз можно набл ю дать в ме рис те мах корне й пророс ш их с е мян, в конус ах нарас тания с те бл я, в ме рис те ме л ис ть е в рас пус каю щ ихс я ве ге тативных поче к. Д л ямногих рас те ний митозы идут наибол е е активно в утре нние и ве черние час ы. Так, у с ос ны обыкнове нной набл ю дае тс я два пика митоза – в 9-11 час ов и 20-23 час а. П оэтому при проращ ивании с е - мян, коре ш ок, дос тигш ий 0,5-1,5 с м, фикс ирую т име нно в это вре мя.
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 8
- 9
- 10
- 11
- 12
- …
- следующая ›
- последняя »