Цитологическое изучение растительных и животных клеток. Машкина О.С - 12 стр.

                                         12
80%-го с пиртаи при не обходимос ти хранят в 70 %-ном с пирте в с те кл ян-
ных фл аконах при пониже нной те мпе ратуре .
        О бщ ие п р ин цип ы изгот ов л ен ия п ос т оян н ы х м икр от ом н ы х п р е-
п ар ат ов . 1. Ф икс ациярас тите л ь ного мате риал а.
        2. П ос те пе нное обе звоживание (дл яизбе жанияс морщ ивания) зафик-
с ированного мате риал а в с пиртах возрас таю щ е й конце нтрации: 20% →
40% → 60% → 80% → 96% → 100% - абс ол ю тный с пирт.
        3. П ропитывание мате риал а рас творите л ями парафина: хл орофор-
мом, кс ил ол ом, тол уол ом ил и бе нзол ом (пос кол ь ку парафин не с ме ш ива-
е тс яни с водой , ни с о с пиртом).
        4. Закл ю че ние мате риал ав парафин (пос л е че го он с тановитс я пл а-
с тичным и из не го можно изготавл ивать тонкие с ре зы), наре зканамикро-
томе с помощ ь ю с тал ь ного ножа. Тол щ ина микротомных с ре зов – 5-10
мкм. Н акл е ивание парафиновых с ре зов напре дме тное с те кл о.
        5. Удал е ние парафинаи окраш ивание с ре зов. Д л я того, чтобы с ре зы
можно был о прокрас ить , проводят удал е ние парафина рас творите л ями
(пос кол ь ку парафин пре пятс твуе т окрас ке ), который в с вою оче ре дь заме -
щ аю тс яс пиртом, азате м водой .
        7. О краш ивание с ре зов. В завис имос ти от це л и ис с л е дованияис пол ь -
зую т разл ичные с пос обы окрас ки. П о проис хожде нию крас ите л и де л ят на
три группы: рас тите л ь ные (ге матокс ил ин, орс е ин), животные (кармин) и
с инте тиче с кие (анил иновые , ал изариновые и др.). П о характе ру де й с твия
крас ите л и де л ят на две группы: цитопл азматиче с кие (в ос новном кис л ые
крас ите л и – эозин и др.) и яде рные (гл авным образом, ос новные : ме тил е -
новый с иний , атакже ге матокс ил ин и кармин).
        8. Закл ю че ние с ре зов в канадс кий бал ь зам под покровное с те кл о.
Бал ь зам пре дс тавл яе т с обой рас творе нную в кс ил ол е с мол у не которых ви-
дов пихты.
        И зготовл е нные таким образом микротомные пос тоянные пре параты
дос тупны дл ите л ь ному хране нию (в те че ние не с кол ь ких л е т).
        И зуче ние митоза, ме й оза, кариотипа л учш е проводить на давл е ных
микропре паратах, т.к. намикротомных с ре зах не ре дко можно увиде ть раз-
руш е нные митозы, нал оже нные однанадругую хромос омы -– кл убки хро-
мос ом, пл охо поддаю щ ие с яанал изу.
        И згот ов л ен иедав л ен ы х п р еп ар ат ов . Р ас с мотрим порядок изготов-
л е нияда влен ых ми кро препа ра т о в из корне вой ме рис те мы пророс тков рас -
те ний . 1. Пр ор ащ ив ан ие с ем ян . Се ме на прорас тить в чаш ках П е три на
вл ажной фил ь тровал ь ной бумаге в те рмос тате при те мпе ратуре 25-260С.
        2. Ф иксация. Коре ш ки ил и ме л кие пророс тки с е мян с коре ш ками,
дос тигш ими дл ины 0,5-2 с м (в завис имос ти от объ е кта), зафикс ировать в
“укс ус ном ал когол е ”: 3 час ти 96%-ного этил ового с пиртаи 1 час ть л е дя-
ной укс ус ной кис л оты. Ф икс ацию прове с ти в с те кл янных пе ницил л иновых
пузырь ках, выде рживая мате риал в комнатных ус л овиях в те че ние от 2-3
час ов до с уток, азате м поме с тить в хол одил ь ник. П ри не обходимос ти дл и-
те л ь ного хране ниямате риал пе ре ве с ти в 70% этил овый с пирт.