Определение скорости дыхания микроорганизмов полярографическим методом анализа. - 8 стр.

    1. Знакомство с полярографом

    Внимательно изучить описание       прибора   и   инструкцию    по   его
эксплуатации (см. Приложение).

    2. Регистрация полярографической волны восстановления кислорода

    Для снятия полярографической волны рабочая ячейка заполняется
дистиллированной водой. На рабочий электрод подаются потенциалы в
диапазоне от 0 до -0,9В. Плато предельного тока диффузии на кривой
восстановления кмслорода должно находиться в интервале от -0,5В до -0,8В.
Рабочая точка выбирается в первой половине плато. Приготовить питательный
раствор и заполнить им рабочую ячейку. Подать на рабочий электрод
потенциал рабочей точки и зарегистрировать при этом потенциале ток через
ячейку. Измерения проводить при температуре 37 °С . Полученное значение
тока мржет служить одной из калибровочных точек, т.к. соответствует
известной концентрации кислорода в растворе ( [O2 ] при атмосферных
условиях и T = 37°C в воде, насыщенной воздухом, равна 6,7 мг л ). Второй
калибровочной точкой служит остаточное значение тока (может оказаться
равным нулю) в растворе при полном отсутствии в нем свободного кислорода.
Она может быть получена введением в раствор какого-либо вещества, не
взаимодействующего с электродом, но легко связывающего свободный
кислород (например, Na 2 SO3 ). Но проще получить эту точку в конце
эксперимента, когда весь кислород в ячейке будет утилизирован
микроорганизмами.

    3. Регистрация дыхания микроорганизмов

    Ввести в ячейку при помощи микрошприца суспензию дрожжей,
предварительно инкубированных в питательной среде в течение 20 мин.
Зарегистрировать на дианрамме самописца изменение во времени предельного
тока через ячейку, которое свидетельствует об изменении концентрации
растворенного кислорода. Поскольку ячейка герметична, через некоторое время
весь кислород исчерпается, и дахание клеток прекратится. По полученной
записи можно определить скорость дыхания дрожжей.
    Электродом Кларка в режиме измерения предельного тока является
удобным датчиком кислород в растворах (и в газовой атмосфере) с
электрическим выходом. Комбинируя его устройство, производящим или
расходующим кислород за счет какого-либо биологически важного вещества,
млжно сделать датчик на это вещество. Так, например, если в
непосредственной близости от электрода Кларка разместить фермент
глюкозсоксидазу, который каиализирует окисление глюкозы кислородом, то
концентрация растворенного кислорода будет падать со скоростью,