Ку-лихорадка: Этиология, эпидемиология, клиника, лабораторная диагностика, лечение. Пашанина Т.П - 20 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВолГУ | Волгоград

Составители: 

Рубрика: 

– 20 –
2.7. Ïîñòàíîâêà òâåðäîôàçíîãî
õåìèëþìèíåñöåíòíîãî àíàëèçà
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ êîêñèåëëåçíîãî ÀÃ è ÀÒ ê ïîñòàíîâêå
òâåðäîôàçíîãî õåìèëþìèíåñöåíòíîãî àíàëèçà èñïîëüçóþò ñýíä-
âè÷-âàðèàíò ïîñòàíîâêè ÕËÈÀ.
 êà÷åñòâå òâåðäîé ôàçû ïðèìåíÿþò èçìåðèòåëüíûå êþâåòû
ôèðìû «LKB Wallac». Äëÿ îáíàðóæåíèÿ ÀÃ êþâåòû ñåíñèáèëèçèðó-
þò ñïåöèôè÷åñêèì Jg â êîíöåíòðàöèè 0,02—0,05 ìã/ìë íà 0,05 Ì
ðàñòâîðå ÊÁÁ, ðÍ 9,5.  êþâåòó âíîñÿò 0,1 Jg, çàêðûâàþò êðûøêîé
è îñòàâëÿþò â õîëîäèëüíèêå íà 18—24 ÷. Ïåðåä ïîñòàíîâêîé ðåàê-
öèè ðàñòâîð Jg ñëèâàþò, êþâåòó ïðîìûâàþò, ïîäñóøèâàþò 10—
15 ìèí ïðè 37
°Ñ. Èññëåäóåìûé ìàòåðèàë ðàçâîäÿò 0,1 Ì ÔÁÐ, ðÍ
7,4, âíîñÿò ïî 0,1 ìë â êþâåòó, âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå 2 ÷.
Ïîñëå ýòîãî êþâåòó ïðîìûâàþò 3 ðàçà ïî 3 ìèí 0,15 Ì ðàñòâîðîì
NaCl ñ òâèí-20 (0,05 %). Çàòåì âíîñÿò ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå ÈÏÊ,
ïðèãîòîâëåííîå íà 0,1 Ì ÔÁÐÞ, ðÍ 7,4, ñ òâèí-20, èíêóáèðóþò
ïðè 37
°Ñ â òå÷åíèå 1 ÷. Ïîñëå îòìûâêè â êþâåòó âíîñÿò ñóáñòðàò-
íóþ ñìåñü, ñîñòîÿùóþ èç 1,25 ìÌ ëþìèíîëà, 2,7 ìÌ ïåðåêèñè
âîäîðîäà è 68 ìÌ ï-éîäîôåíîëà â 0,1 Ì òðèñ-HCL áóôåðå; ðÍ 8,6.
×åðåç 5—10 ìèí ïðîèçâîäÿò çàìåð íà ëþìèíîìåòðå LKB 1250 Wallac.
Ðåàêöèþ ñîïðîâîæäàþò ïîñòàíîâêîé ñëåäóþùèõ êîíòðîëåé:
1) êîíòðîëü íåñïåöèôè÷åñêîé ñîðáöèè ÈÏÊ (â ñåíñèáèëèçèðî-
âàííóþ ëóíêó âíîñÿò ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå ÈÏÊ, à ïîñëå èíêóáà-
öèè è ïðîìûâêè — ðàáî÷èé ðàñòâîð ñóáñòðàòà, ýòî «-» êîíòðîëü,
ïîêàçàòåëü âåëè÷èíû êâàíòîâ ñâåòà — åäèíèöû ìÂ); 2) êîíò-
ðîëü ñóáñòðàòà (â ñåíñèáèëèçèðîâàííóþ ëóíêó âíîñÿò òîëüêî ñóá-
ñòðàò, ïîêàçàòåëü ïðèáîðà — åäèíèöû ìÂ); 3) êîíòðîëü ôîíà
ïóñòûõ êþâåò (â íåñåíñèáèëèçèðîâàííûå êþâåòû âíîñÿò òîëüêî
ñóáñòðàòíóþ ñìåñü).
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ÀÒ ê êîêñèåëëàì Áåðíåòà ÕËÈÀ êþâåòû
ñåíñèáèëèçèðóþò êîêñèåëëåçíûì ÀÃ â äîçå 0,02—0,05 ìã/ìë íà
0,05 Ì ÊÁÁ, ðÍ 9,5. Ñåíñèáèëèçàöèþ ïðîâîäÿò ïðè 4
°Ñ â òå÷å-
íèå 18—24 ÷. Èññëåäóåìûå ñûâîðîòêè ðàçâîäÿò íà 0,1 Ì ÔÁÐ,
ðÍ 7,4 è âíîñÿò ïî 0,1 ìë â êþâåòû, èíêóáèðóþò 1—2 ÷, ïîñëå
÷åãî ëóíêè ïðîìûâàþò 0,15 Ì NaCl ñ òâèí-20. Çàòåì âíîñÿò
ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå àíòèâèäîâîãî êîíúþãàòà íà 1 ÷, êþâåòû îò-
ìûâàþò, âíîñÿò ñóáñòðàòíóþ ñìåñü è ó÷èòûâàþò ðåçóëüòàò íà
              2.7. Ïîñòàíîâêà òâåðäîôàçíîãî
              õåìèëþìèíåñöåíòíîãî àíàëèçà


      Äëÿ îïðåäåëåíèÿ êîêñèåëëåçíîãî ÀÃ è ÀÒ ê ïîñòàíîâêå
òâåðäîôàçíîãî õåìèëþìèíåñöåíòíîãî àíàëèçà èñïîëüçóþò ñýíä-
âè÷-âàðèàíò ïîñòàíîâêè ÕËÈÀ.
       êà÷åñòâå òâåðäîé ôàçû ïðèìåíÿþò èçìåðèòåëüíûå êþâåòû
ôèðìû «LKB Wallac». Äëÿ îáíàðóæåíèÿ ÀÃ êþâåòû ñåíñèáèëèçèðó-
þò ñïåöèôè÷åñêèì Jg â êîíöåíòðàöèè 0,02—0,05 ìã/ìë íà 0,05 Ì
ðàñòâîðå ÊÁÁ, ðÍ 9,5.  êþâåòó âíîñÿò 0,1 Jg, çàêðûâàþò êðûøêîé
è îñòàâëÿþò â õîëîäèëüíèêå íà 18—24 ÷. Ïåðåä ïîñòàíîâêîé ðåàê-
öèè ðàñòâîð Jg ñëèâàþò, êþâåòó ïðîìûâàþò, ïîäñóøèâàþò 10—
15 ìèí ïðè 37 °Ñ. Èññëåäóåìûé ìàòåðèàë ðàçâîäÿò 0,1 Ì ÔÁÐ, ðÍ
7,4, âíîñÿò ïî 0,1 ìë â êþâåòó, âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå 2 ÷.
Ïîñëå ýòîãî êþâåòó ïðîìûâàþò 3 ðàçà ïî 3 ìèí 0,15 Ì ðàñòâîðîì
NaCl ñ òâèí-20 (0,05 %). Çàòåì âíîñÿò ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå ÈÏÊ,
ïðèãîòîâëåííîå íà 0,1 Ì ÔÁÐÞ, ðÍ 7,4, ñ òâèí-20, èíêóáèðóþò
ïðè 37 °Ñ â òå÷åíèå 1 ÷. Ïîñëå îòìûâêè â êþâåòó âíîñÿò ñóáñòðàò-
íóþ ñìåñü, ñîñòîÿùóþ èç 1,25 ìÌ ëþìèíîëà, 2,7 ìÌ ïåðåêèñè
âîäîðîäà è 68 ìÌ ï-éîäîôåíîëà â 0,1 Ì òðèñ-HCL áóôåðå; ðÍ 8,6.
×åðåç 5—10 ìèí ïðîèçâîäÿò çàìåð íà ëþìèíîìåòðå LKB 1250 Wallac.
      Ðåàêöèþ ñîïðîâîæäàþò ïîñòàíîâêîé ñëåäóþùèõ êîíòðîëåé:
1) êîíòðîëü íåñïåöèôè÷åñêîé ñîðáöèè ÈÏÊ (â ñåíñèáèëèçèðî-
âàííóþ ëóíêó âíîñÿò ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå ÈÏÊ, à ïîñëå èíêóáà-
öèè è ïðîìûâêè — ðàáî÷èé ðàñòâîð ñóáñòðàòà, ýòî «-» êîíòðîëü,
ïîêàçàòåëü âåëè÷èíû êâàíòîâ ñâåòà — åäèíèöû ìÂ); 2) êîíò-
ðîëü ñóáñòðàòà (â ñåíñèáèëèçèðîâàííóþ ëóíêó âíîñÿò òîëüêî ñóá-
ñòðàò, ïîêàçàòåëü ïðèáîðà — åäèíèöû ìÂ); 3) êîíòðîëü ôîíà
ïóñòûõ êþâåò (â íåñåíñèáèëèçèðîâàííûå êþâåòû âíîñÿò òîëüêî
ñóáñòðàòíóþ ñìåñü).
      Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ÀÒ ê êîêñèåëëàì Áåðíåòà ÕËÈÀ êþâåòû
ñåíñèáèëèçèðóþò êîêñèåëëåçíûì ÀÃ â äîçå 0,02—0,05 ìã/ìë íà
0,05 Ì ÊÁÁ, ðÍ 9,5. Ñåíñèáèëèçàöèþ ïðîâîäÿò ïðè 4 °Ñ â òå÷å-
íèå 18—24 ÷. Èññëåäóåìûå ñûâîðîòêè ðàçâîäÿò íà 0,1 Ì ÔÁÐ,
ðÍ 7,4 è âíîñÿò ïî 0,1 ìë â êþâåòû, èíêóáèðóþò 1—2 ÷, ïîñëå
÷åãî ëóíêè ïðîìûâàþò 0,15 Ì NaCl ñ òâèí-20. Çàòåì âíîñÿò
ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå àíòèâèäîâîãî êîíúþãàòà íà 1 ÷, êþâåòû îò-
ìûâàþò, âíîñÿò ñóáñòðàòíóþ ñìåñü è ó÷èòûâàþò ðåçóëüòàò íà

                             – 20 –

Страницы