Ку-лихорадка: Этиология, эпидемиология, клиника, лабораторная диагностика, лечение. Пашанина Т.П - 22 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВолГУ | Волгоград

Составители: 

Рубрика: 

– 22 –
0,1 ìë. Ïîñëå èíêóáàöèè ïðè 4
°Ñ â òå÷åíèå 18 ÷ Jg ñëèâàþò,
ñòðèïû îáðàáàòûâàþò 1%-ì ðàñòâîðîì ÁÑÀ (1 ÷ ïðè 37
°Ñ), çà-
òåì òðèæäû îòìûâàþò ïðîìûâî÷íûì ðàñòâîðîì è âíîñÿò Àà (èñ-
ñëåäóåìûé è êîíòðîëüíûé). Ïîñëå ÷àñîâîé ýêñïîçèöèè ïðè 37
°Ñ
ñòðèïû äåñÿòèêðàòíî ïðîìûâàþò. Óðîâåíü ôëóîðåñöèðóþùèõ èîíîâ
åâðîïèÿ îïðåäåëÿþò íà ôëóîðèìåòðå ñ âðåìåííûì ðàçðåøåíèåì
«Àðêóñ 1230» (LKB — WALLAK). Ïåðåä èçìåðåíèåì ôëóîðåñöè-
ðóþùåé àêòèâíîñòè â ëóíêè ñòðèïîâ âíîñÿò óñèëèâàþùèé ðà-
ñòâîð ïî 0,02 ìë íà 5—10 ìèí. Ñîñòàâ ïðîìûâî÷íîãî áóôåðà
(Ò 5Ò): 50 ìÌ òðèñ-HCl; 0,9 Ì NaHl; 0,05%-é òâèí-20. Áóôåð
TBS äëÿ ðàçâåäåíèÿ êîíúþãàòà è ìàòåðèàëà (ÀÃ): 50 ìÌ òðèñ-
HCl; 0,9 Ì NaCl; 0,02%-é òâèí-20; 20 ìÌ ÄÒÏÀ. Âñå ðàñòâîðû
ãîòîâÿò íà äåèîíèçèðîâàííîé âîäå.
Êîíöåíòðàöèþ áåëêà â êîíúþãàòå Lg-ÄÒÏÀÀ-Åè îïðåäåëÿ-
þò íà ñïåêòðîôîòîìåòðå ïðè 280 èì, à êîíöåíòðàöèþ èîíîâ
åâðîïèÿ — ïî êàëèáðîâî÷íîé êðèâîé ñ èçâåñòíûìè êîíöåíòðà-
öèÿìè Åè â óñèëèâàþùåì ðàñòâîðå íà «Àðêóñ-1230». Ñîîòíîøå-
íèå áåëîê-åâðîïèé â êîíúþãàòàõ ñîñòàâëÿåò 1 : 8 äëÿ ïðÿìîãî è
1 : 25 äëÿ íåïðÿìîãî âàðèàíòîâ.
Ðåçóëüòàò ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûì â ñëó÷àå ïðåâûøåíèÿ
âåëè÷èíû èçìåðÿåìîãî ñèãíàëà íàä âåëè÷èíîé ïîðîãîâîãî óðîâ-
íÿ ôëóîðåñöåíöèè îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ. Ïîðîãîâûé óðîâåíü
îïðåäåëÿþò êàê ñðåäíåàðèôìåòè÷åñêîå çíà÷åíèå ñèãíàëà îòðèöà-
òåëüíîãî êîíòðîëÿ ïëþñ òðè ñòàíäàðòíûõ îòêëîíåíèÿ.
2.11. Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ëàòåêñà
 ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ëàòåêñà èñïîëüçóþò àíòèãåííûé è
àíòèòåëüíûé äèàãíîñòèêóìû. Àíòèãåííûé äèàãíîñòèêóì ãîòîâÿò
ñëåäóþùèì îáðàçîì: 2 ìë 5%-é ñóñïåíçèè ëàòåêñà ÏÀ-ÀÊ2 ðàçìå-
ðîì 1,2—1,8 ìêì îñàæäàþò öåíòðèôóãèðîâàíèåì ïðè 2000 îá/ìèí
â òå÷åíèå 5 ìèí. Îñàäîê ñóñïåíäèðóþò â 1 ìë 0,1 Ì ÔÁÐ, ðÍ 7,2 è
äîáàâëÿþò 0,1 ìë êîêñèåëëåçíîãî ÀÃ (0,2 ìã, ðàçâåäåííîãî â 2 ìë
ÔÁÐ). Ñìåñü âûäåðæèâàþò 3 ÷ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, ïåðèî-
äè÷åñêè ïîìåøèâàþò, ïîñëå ÷åãî îñàæäàþò è äâàæäû ïðîìûâàþò
ÔÁÐ. ÐÀË âûïîëíÿþò â 96 ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ, â ëóíêàõ êîòîðûõ
ãîòîâÿò â îáúåìå 0,05 ìë ïîñëåäîâàòåëüíî äâóêðàòíûå ðàçâåäåíèÿ
èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè â 0,05 Ì ÔÁÐ, ðÍ 7,2. Ïîñëå ýòîãî â ëóíêè
0,1 ìë. Ïîñëå èíêóáàöèè ïðè 4 °Ñ â òå÷åíèå 18 ÷ Jg ñëèâàþò,
ñòðèïû îáðàáàòûâàþò 1%-ì ðàñòâîðîì ÁÑÀ (1 ÷ ïðè 37 °Ñ), çà-
òåì òðèæäû îòìûâàþò ïðîìûâî÷íûì ðàñòâîðîì è âíîñÿò Àà (èñ-
ñëåäóåìûé è êîíòðîëüíûé). Ïîñëå ÷àñîâîé ýêñïîçèöèè ïðè 37 °Ñ
ñòðèïû äåñÿòèêðàòíî ïðîìûâàþò. Óðîâåíü ôëóîðåñöèðóþùèõ èîíîâ
åâðîïèÿ îïðåäåëÿþò íà ôëóîðèìåòðå ñ âðåìåííûì ðàçðåøåíèåì
«Àðêóñ 1230» (LKB — WALLAK). Ïåðåä èçìåðåíèåì ôëóîðåñöè-
ðóþùåé àêòèâíîñòè â ëóíêè ñòðèïîâ âíîñÿò óñèëèâàþùèé ðà-
ñòâîð ïî 0,02 ìë íà 5—10 ìèí. Ñîñòàâ ïðîìûâî÷íîãî áóôåðà
(Ò 5Ò): 50 ìÌ òðèñ-HCl; 0,9 Ì NaHl; 0,05%-é òâèí-20. Áóôåð
TBS äëÿ ðàçâåäåíèÿ êîíúþãàòà è ìàòåðèàëà (ÀÃ): 50 ìÌ òðèñ-
HCl; 0,9 Ì NaCl; 0,02%-é òâèí-20; 20 ìÌ ÄÒÏÀ. Âñå ðàñòâîðû
ãîòîâÿò íà äåèîíèçèðîâàííîé âîäå.
      Êîíöåíòðàöèþ áåëêà â êîíúþãàòå Lg-ÄÒÏÀÀ-Åè îïðåäåëÿ-
þò íà ñïåêòðîôîòîìåòðå ïðè 280 èì, à êîíöåíòðàöèþ èîíîâ
åâðîïèÿ — ïî êàëèáðîâî÷íîé êðèâîé ñ èçâåñòíûìè êîíöåíòðà-
öèÿìè Åè â óñèëèâàþùåì ðàñòâîðå íà «Àðêóñ-1230». Ñîîòíîøå-
íèå áåëîê-åâðîïèé â êîíúþãàòàõ ñîñòàâëÿåò 1 : 8 äëÿ ïðÿìîãî è
1 : 25 äëÿ íåïðÿìîãî âàðèàíòîâ.
      Ðåçóëüòàò ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûì â ñëó÷àå ïðåâûøåíèÿ
âåëè÷èíû èçìåðÿåìîãî ñèãíàëà íàä âåëè÷èíîé ïîðîãîâîãî óðîâ-
íÿ ôëóîðåñöåíöèè îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ. Ïîðîãîâûé óðîâåíü
îïðåäåëÿþò êàê ñðåäíåàðèôìåòè÷åñêîå çíà÷åíèå ñèãíàëà îòðèöà-
òåëüíîãî êîíòðîëÿ ïëþñ òðè ñòàíäàðòíûõ îòêëîíåíèÿ.

    2.11. Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ëàòåêñà

     Â ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ëàòåêñà èñïîëüçóþò àíòèãåííûé è
àíòèòåëüíûé äèàãíîñòèêóìû. Àíòèãåííûé äèàãíîñòèêóì ãîòîâÿò
ñëåäóþùèì îáðàçîì: 2 ìë 5%-é ñóñïåíçèè ëàòåêñà ÏÀ-ÀÊ2 ðàçìå-
ðîì 1,2—1,8 ìêì îñàæäàþò öåíòðèôóãèðîâàíèåì ïðè 2000 îá/ìèí
â òå÷åíèå 5 ìèí. Îñàäîê ñóñïåíäèðóþò â 1 ìë 0,1 Ì ÔÁÐ, ðÍ 7,2 è
äîáàâëÿþò 0,1 ìë êîêñèåëëåçíîãî ÀÃ (0,2 ìã, ðàçâåäåííîãî â 2 ìë
ÔÁÐ). Ñìåñü âûäåðæèâàþò 3 ÷ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, ïåðèî-
äè÷åñêè ïîìåøèâàþò, ïîñëå ÷åãî îñàæäàþò è äâàæäû ïðîìûâàþò
ÔÁÐ. ÐÀË âûïîëíÿþò â 96 ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ, â ëóíêàõ êîòîðûõ
ãîòîâÿò â îáúåìå 0,05 ìë ïîñëåäîâàòåëüíî äâóêðàòíûå ðàçâåäåíèÿ
èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè â 0,05 Ì ÔÁÐ, ðÍ 7,2. Ïîñëå ýòîãî â ëóíêè

                             – 22 –

Страницы