Методические указания для самостоятельной подготовки к лабораторным занятиям по биологической химии. Пластинина З.А - 14 стр.

UptoLike

Рубрика: 

Хроматографию на пластинках проводят в закрытых
стеклянных камерах, предварительно насыщенных парами
растворителя, восходящим способом при комнатной
темпераруре или при нагревании одномерно или двумерно.
При одномерной хроматографии пробы на пластинку
наносят в виде полос. Двумерный способ (второй
растворитель движется по пластинке в направлении, пер-
пендикулярном первому) используют для повышения
эффективности метода.
Часто тонкослойную хроматографию сочетают с
электрофорезом (метод пептидных карт). В этом случае
пробу на пластинку наносят в виде небольшого пятнышка (d
~ 2—3 мм) в одном из углов пластинки на расстоянии 20 мм
от ее краев.
Многие коммерческие сорбенты для тонкослойной
хроматографии содержат флуоресцентные красители, что
позволяет идентифицировать разделяемые соединения,
поглощаемые в ультрафиолетовой области спектра.
Разделение аминокислот (гидролизатов белков)
методом тонкослойной хроматографии осуществляют на
пластинках, покрытых тонким слоем ионообменной смолы
полистирольной природы с сульфокислотными
группировками (типа Дауэкс 50х8) или ионообменной
целлюлозой. Такие пластинки выпускаются про-
мышленностью, например «Фиксион 50х8» (Венгрия), или
могут быть приготовлены в лаборатории.
Сочетание на пластинках «Фиксион» процессов
ионообменной и тонкослойной хроматографии при
разделении обусловливает высокую разрешающую
способность этого метода.
Пластинки могут быть использованы для разделения
аминокислот, олигопептидов, аминов и др.
Противоточная хроматография. Этот метод
разделения основан на распределении соединений между
двумя несмешивающимися жидкими фазами. Он отличается
от обычной распределительной хроматографии тем, что ни
одна из фаз не фиксируется на сорбенте или бумаге, однако в
основе его лежит тот же принцип, что и в традиционной
распределительной хроматографии, а именно различие в
коэффициентах распределения соединений между двумя
несмешивающимися фазами. В качестве фаз для
противоточного разделения применяют смеси растворителей,
буферов, солей и различные комплексообразующие
реагенты.
Для проведения такого разделения пользуются
специальным прибором для противоточного распределения
       Хроматографию на пластинках проводят в закрытых               целлюлозой.     Такие           пластинки      выпускаются         про-
стеклянных камерах, предварительно насыщенных парами                 мышленностью, например «Фиксион 50х8» (Венгрия), или
растворителя,      восходящим      способом      при    комнатной    могут быть приготовлены в лаборатории.
темпераруре или при нагревании одномерно или двумерно.                     Сочетание на пластинках «Фиксион» процессов
При одномерной хроматографии пробы на пластинку                      ионообменной         и       тонкослойной     хроматографии        при
наносят     в    виде   полос.   Двумерный       способ    (второй   разделении      обусловливает             высокую    разрешающую
растворитель движется по пластинке в направлении, пер-               способность этого метода.
пендикулярном       первому)     используют      для   повышения           Пластинки могут быть использованы для разделения
эффективности метода.                                                аминокислот, олигопептидов, аминов и др.
       Часто тонкослойную хроматографию сочетают с                         Противоточная              хроматография.          Этот     метод
электрофорезом (метод пептидных карт). В этом случае                 разделения основан на распределении соединений между
пробу на пластинку наносят в виде небольшого пятнышка (d             двумя несмешивающимися жидкими фазами. Он отличается
~ 2—3 мм) в одном из углов пластинки на расстоянии 20 мм             от обычной распределительной хроматографии тем, что ни
от ее краев.                                                         одна из фаз не фиксируется на сорбенте или бумаге, однако в
       Многие коммерческие сорбенты для тонкослойной                 основе его лежит тот же принцип, что и в традиционной
хроматографии содержат флуоресцентные красители, что                 распределительной хроматографии, а именно различие в
позволяет       идентифицировать      разделяемые      соединения,   коэффициентах распределения соединений между двумя
поглощаемые в ультрафиолетовой области спектра.                      несмешивающимися              фазами.     В   качестве      фаз     для
       Разделение       аминокислот        (гидролизатов   белков)   противоточного разделения применяют смеси растворителей,
методом тонкослойной хроматографии осуществляют на                   буферов,     солей       и     различные      комплексообразующие
пластинках, покрытых тонким слоем ионообменной смолы                 реагенты.
полистирольной          природы        с       сульфокислотными            Для     проведения         такого     разделения     пользуются
группировками (типа Дауэкс 50х8) или ионообменной                    специальным прибором для противоточного распределения