Лабораторный практикум по общей микробиологии. Прунтова О.В - 25 стр.

Bacillus mycoides, Bacillus subtilis. На предметном стекле делают мазок су-
точной культуры бактерий, высушивают его на воздухе и фиксируют в те-
чение 2 - 3 мин в парах осмиевой кислоты. С этой целью на дно чашки
Петри наносят 2 - 3 капли фиксатора, а предметное стекло помещают маз-
ком вниз на обрезки стекла. По окончании фиксации препарат опускают на
2 - 3 мин в стаканчик с раствором 1 н. HCl для гидролиза рибосомальной
РНК. Стакан держат на водяной бане при 60 °С. После гидролиза препа-
рат немедленно промывают водой. Затем мазок помещают на 15 мин в
1%-ный раствор формалина, вновь промывают водой и окрашивают в тече-
ние 1 - 2 мин 0,1 - 1,0%-ным раствором основного фуксина. Препарат
промывают, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.
Цитоплазма окрашивается в розовый цвет, нуклеоид - в ярко-малиновый.
      Эндоспоры. Эндоспоры образуют бактерии родов Bacillus,
Clostridium и некоторых других. Для обнаружения способности клеток к
спорообразованию лучше использовать старые культуры. Споры можно
обнаружить при наблюдении живых клеток, а также путем дифференци-
ального окрашивания цитоплазмы и споры. В случае выявления у микро-
организма способности к образованию спор необходимо обратить внима-
ние на тип спорообразования (бациллярный, клостридиальный, плектриди-
альный), расположение споры в клетке (центральное, эксцентральное или
полярное), форму свободных спор (круглая, овальная или продолговатая) и
определить их размеры. С этой целью просматривают клетки 2 - 3 -
суточной культуры, так как большинство спорообразующих бактерий про-
ходят за этот период времени все стадии развития - от вегетативной клет-
ки до свободной споры.
      Наблюдение спор в живых клетках. Споры по сравнению с цито-
плазмой характеризуются более высоким показателем преломления света,
поэтому при микроскопировании в светлом поле они видны как более тем-
ные включения округлой или овальной формы. При использовании фазо-
во-контрастного устройства споры имеют вид светлых включений на фоне
почти черных клеток.
      Метод выявления спор негативным окрашиванием. На предметном
стекле готовят тонкий мазок клеток спорулирующих бактерий, подсуши-
вают на воздухе и фиксируют в пламени. Затем на 3 - 5 мин наносят мети-
леновый синий или на 1 - 3 мин фуксин, после чего препарат осторожно
просушивают на воздухе. Просматривают с иммерсией.
                                                                         25