Лабораторный практикум по общей микробиологии. Прунтова О.В - 26 стр.

UptoLike

Составители: 

Рубрика: 

Вегетативные клетки бактерий прокрашиваются, а споры, имеющие
многослойную, труднопроницаемую оболочку - нет. Они видны как силь-
но преломляющие свет сферические или овальные образования, находящиеся
в зависимости от стадии спорообразования внутри или вне клеток бактерий.
Метод удобен при количественной оценке процесса спорообразова-
ния путем подсчета количества спор и вегетативных клеток в разных усло-
виях роста бактерий.
Дифференциальная окраска споры по методу Пешкова. Споры и ци-
топлазму окрашивают при нагревании. Промывание препарата водой ведет к
обесцвечиванию цитоплазмы, тогда как спора прочно удерживает краситель.
На обезжиренном предметном стекле готовят мазок, высушивают его
на воздухе, фиксируют в пламени горелки и заливают раствором метиле-
нового синего по Леффлеру. Краситель доводят до кипения, держа пред-
метное стекло над пламенем горелки. По мере испарения красителя добав-
ляют новые его порции. Продолжительность окраски, считая с момента за-
кипания красителя, - 10 - 20 с. Затем предметное стекло охлаждают, пре-
парат тщательно промывают водой, после чего клетки в течение 30 с до-
крашивают 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного или саф-
ранина. Краситель сливают, препарат промывают водой и просматривают
с иммерсионной системой. При правильном окрашивании клетки имеют
красный цвет, а споры - синий. Вместо метиленового синего можно ис-
пользовать малахитовый зеленый. В этом случае препарат, фиксированный
в пламени горелки, заливают на 7 - 10 мин 7,5%-ным раствором малахито-
вого зеленого. Окрашивание проводят с подогревом, помещая препарат
над сосудом с кипящей водой или над пламенем горелки. По окончании
окраски предметное стекло охлаждают, промывают препарат водой и до-
крашивают клетки 0,25%-ным водным раствором сафранина в течение 1 -
2 мин. Споры окрашиваются в зеленый цвет, клетки - в розовый.
Окраска капсулы. Эти структуры часто имеют консистенцию геля и
плохо видны при микроскопировании живых клеток. Химический состав
капсул у разных бактерий неодинаков, поэтому их нельзя выявить каким-
либо одним методом окраски. Кроме того, капсулы при окраске легко де-
формируются, а вещество капсулы слабо связывает краситель, который
легко отмывается в процессе обработки препарата. Чаще всего для выяв-
ления капсул применяют способ «негативной» окраски (негативного кон-
трастирования) с помощью жидкой туши. Для этого небольшое количество
26