Лабораторный практикум по общей микробиологии. Прунтова О.В - 44 стр.

UptoLike

Составители: 

Рубрика: 

ки осели и при микроскопировании были видны в одной плоскости. Под-
вижные клетки перед заполнением камеры убивают нагреванием или сус-
пендированием в 0,5%-ном водном растворе формалина.
Число клеток подсчитывают с объективом или 40х. С иммерсион-
ным объективом работать нельзя, так как его фокусное расстояние меньше
толщины стекла камеры. Обычно подсчитывают клетки микроорганизмов
в 10 больших или 20 маленьких квадратах сетки, перемещая последние по
диагонали. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также
клетки, пересекающие верхнюю и правую стороны квадрата. При подсчете
количество клеток в большом квадрате не должно превышать 20, а в малом -
10, в противном случае исходную суспензию разводят водопроводной во-
дой. Для получения достоверного результата общее число подсчитанных
клеток микроорганизмов должно быть не менее 600. Подсчет клеток по-
вторяют 3 - 4 раза, каждый раз заново монтируя камеру и заполняя ее ис-
следуемой взвесью микроорганизмов. Это обеспечивает большую точ-
ность, чем подсчет 600 клеток при однократном монтаже камеры. Количе-
ство клеток в 1 мл исследуемой суспензии вычисляют по формуле
хл
АЛ
°
3
М = -------- и,
hS где
М- число клеток в 1 мл суспензии;
А - среднее число клеток в 1 квадрате сетки;
h - высота камеры, мм; . S - площадь 1
квадрата сетки, мм
2
;
10
3
- коэффициент перевода кубических сантиметров в кубические
миллиметры;
п - разведение исследуемой суспензии.
Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках (метод
Виноградского-Брида). Преимущество метода заключается в том, что фик-
сированные окрашенные препараты хорошо сохраняются, поэтому подсчет
можно проводить в удобное для исследователя время. Для этого хорошо
обезжиренное предметное стекло помещают на миллиметровую бумагу, на
которой отмечен прямоугольник площадью 4 или 6 см
2
. Затем на стекло из
микропипетки наносят точно измеренный объем исследуемой суспензии
(0,01, 0,02 или 0,03 мл) и каплю 0,03 - 0,1%-ного водного раствора агара.
Нанесенную суспензию равномерно распределяют петлей по площади, от-
меченной на миллиметровой бумаге. Препарат подсушивают на воздухе,
фиксируют 10-20 мин 96%-ным спиртом и окрашивают 1- 2 мин фукси-
ном Циля или любым другим красителем. Краситель сливают, препарат
44